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C-型单域抗体骨架优化策略及其在抗肿瘤药物研发中的创新应用与前景展望

一、引言

1.1研究背景与意义

肿瘤严重威胁人类健康，其发病率和死亡率逐年上升。根据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据，全球新发癌症病例1929万例，癌症死亡病例996万例。传统的肿瘤治疗方法，如手术、化疗和放疗，虽在一定程度上取得了成效，但仍存在诸多局限性，如化疗药物的毒副作用、放疗对正常组织的损伤等。因此，开发高效、低毒的新型抗肿瘤药物成为当前肿瘤治疗领域的研究热点。

单域抗体作为一类新型抗体，具有独特的优势。它仅包含一个单一的抗原结合结构域，分子量小，通常只有12-15kDa，约为传统抗体的1/10。这使得单域抗体具有良好的组织穿透性，能够更有效地到达肿瘤组织，与肿瘤抗原结合。单域抗体还具有稳定性强、易于重组表达、免疫原性低等优点，在肿瘤诊断和治疗领域展现出巨大的应用潜力。

C-型单域抗体是一种基于抗体Fc段CH2结构域的新型单域抗体。CH2结构域（~12kDa）与VH相似，主要由七个β-折叠（A到G）组成，由三个loop和两个α-helix连接，并含有一对天然的二硫键。其三个loop区与VH的三个互补决定区（CDR）相似，可引入突变构建抗体库。与其他单域抗体相比，C-型单域抗体的优势在于其Fc段与Fc受体（如neonatalFcreceptor，FcRn）等存在部分结合位点，经过改造后的CH2骨架，有可能和FcRn相互结合，从而延长血浆半衰期，实现（或部分实现）全长抗体的功能。

在抗肿瘤药物研发中，C-型单域抗体骨架的优化至关重要。通过优化，可以进一步提高C-型单域抗体的稳定性、亲和力和特异性，增强其抗肿瘤活性，为肿瘤治疗提供更有效的手段。本研究旨在对C-型单域抗体骨架进行优化，并探究其在抗肿瘤药物研发中的应用，具有重要的理论意义和实际应用价值。

1.2国内外研究现状

国内外对C-型单域抗体的研究取得了一定的进展。在骨架优化方面，研究人员通过多种方法对CH2结构域进行改造。如通过引入一对二硫键得到CH2的突变体m01，其Tm值比CH2提高近20℃；通过截去CH2的N-端的七个处于无规则状态的氨基酸，得到截短的突变体CH2s，CH2s的抗聚集能力得到显著提高。将这两者结合得到的突变体m01s，其Tm值比CH2高30℃，具有更好的可溶表达与蛋白酶抗性，且具有更好的依赖于pH的与人FcRn的结合能力，在不同动物模型中的血浆半衰期可达10小时左右，远远长于与其分子量相似的其它结构域（如VH的血浆半衰期仅有几分钟）。

在抗肿瘤应用方面，已有研究成功筛选出针对肿瘤相关抗原的C-型单域抗体。例如，以人抗体IgG恒定区CH2结构域的突变体m01s为骨架，构建多肽及蛋白质文库，以间皮素为抗原筛选获得了靶向间皮素的高亲和力C-型单域抗体F3，该抗体经ELISA、流式细胞分析验证，能够与筛选所用抗原间皮素及细胞表面的间皮素相结合，并对间皮素高表达的癌细胞增殖具有直接抑制作用。

然而，目前C-型单域抗体的研究仍存在一些不足。在骨架优化方面，虽然已取得了一些成果，但仍需进一步探索更有效的优化策略，以提高C-型单域抗体的性能。在抗肿瘤应用方面，C-型单域抗体在体内的药代动力学和药效学研究还不够深入，其作用机制也有待进一步阐明。此外，C-型单域抗体与其他治疗方法的联合应用研究较少，如何将C-型单域抗体与传统的化疗、放疗以及新兴的免疫治疗等方法相结合，以提高肿瘤治疗效果，是未来研究的重要方向。

1.3研究目的与创新点

本研究旨在优化C-型单域抗体骨架，提高其稳定性、亲和力和特异性，并深入探究其在抗肿瘤药物研发中的应用。具体而言，通过对CH2结构域进行定点突变、引入新的二硫键等方法，构建一系列C-型单域抗体突变体，筛选出性能优良的突变体；利用噬菌体展示技术和酵母展示技术，筛选针对肿瘤相关抗原的C-型单域抗体，并对其生物学特性进行鉴定；通过体内外实验，研究优化后的C-型单域抗体的抗肿瘤活性和作用机制，为其在肿瘤治疗中的应用提供理论依据和实验基础。

本研究的创新点主要体现在以下两个方面：一是采用新的优化方法对C-型单域抗体骨架进行改造，综合考虑稳定性、亲和力和特异性等因素，有望获得性能更优异的C-型单域抗体；二是将优化后的C-型单域抗体应用于多种肿瘤模型，从多个角度验证其抗肿瘤效果，为C-型单域抗体在抗肿瘤药物研发中的应用提供更全面的实验数据。

二、C