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2025北京pcr上岗证考试题及答案

1.【单选】2025版《北京市临床基因扩增检验实验室管理细则》规定，PCR实验室各区域压差梯度应保持在

A.≥5Pa

B.≥10Pa

C.≥15Pa

D.≥20Pa

答案：B

解析：细则4.3.2条明确要求试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区逐级负压，相邻区域压差≥10Pa，防止气溶胶逆流。

2.【单选】下列哪种内参基因最适合用于人源样本RNA病毒RT-qPCR的定量检测

A.β-actin

B.GAPDH

C.RNP

D.18SrRNA

答案：C

解析：RNP（核糖核蛋白）为细胞内稳定表达的RNA结合蛋白，其mRNA水平受采样、保存影响小，较DNA内参更能反映RNA完整性。

3.【单选】在ABI7500FastDx仪器上，运行50μL体系时，下列哪项被动参比染料（ROX）浓度最优

A.0.5μmol/L

B.1.0μmol/L

C.1.5μmol/L

D.2.0μmol/L

答案：B

解析：ABI官方推荐ROX终浓度1.0μmol/L，可校正移液及蒸发差异，过高会抑制Taq酶活性。

4.【单选】2025年国家卫健委对新冠核酸检测“Ct值≥40”的判定标准，其对应靶基因N的拷贝数约为

A.10copies/mL

B.100copies/mL

C.1000copies/mL

D.10000copies/mL

答案：A

解析：使用国家参考品建立标准曲线，N基因Ct40.0对应10copies/mL（95%置信区间8–12）。

5.【单选】下列哪项不是PCR假阴性的常见原因

A.样本采集后72h未提取

B.蛋白酶K失活

C.引物二聚体过多

D.扩增仪热盖温度110℃

答案：C

解析：引物二聚体过多导致假阳性；其余均可致模板降解或扩增失败。

6.【单选】关于UNG酶防污染体系，下列说法正确的是

A.dUTP替代dTTP比例需≥80%

B.50℃2min即可完全消化含U扩增子

C.UNG在95℃灭活后仍可复活

D.适用于所有数字PCR平台

答案：B

解析：UNG在50℃2min可水解含UDNA，dUTP替代比例≥60%即可，95℃10min不可逆灭活，数字PCR若使用微滴石蜡油包被则UNG无法进入微滴。

7.【单选】提取HPV16/18DNA时，下列哪种裂解液添加剂对去除组蛋白最有效

A.异硫氰酸胍

B.N-月桂酰肌氨酸钠

C.DTT

D.蛋白酶K

答案：D

解析：蛋白酶K可水解组蛋白，释放病毒DNA；胍盐主要破坏细胞膜，DTT还原二硫键。

8.【单选】数字PCR中，若微滴总数为20000，阳性微滴数15，Poisson校正后浓度为

A.0.75copies/μL

B.0.85copies/μL

C.0.95copies/μL

D.1.05copies/μL

答案：B

解析：λ=?ln[(20000?15)/20000]=0.00075，乘以微滴体积0.85nL，换算为0.85copies/μL。

9.【单选】下列哪项属于一级生物安全实验室可开展的PCR项目

A.登革病毒分型

B.结核分枝杆菌耐药基因检测

C.甲型H1N1流感

D.肠道病毒71型

答案：D

解析：肠道病毒71型为危害程度第三类，可在BSL-1操作；登革、结核、甲流需BSL-2。

10.【单选】关于荧光探针TaqManMGB，下列哪项描述错误

A.3’端MGB可提高Tm值

B.探针长度可缩短至13bp

C.荧光基团常用FAM、VIC

D.MGB可消除引物二聚体荧光

答案：D

解析：MGB不识别引物二聚体，需通过引物设计优化；其余均正确。

11.【单选】在qPCR标准曲线中，若斜率?3.32，扩增效率为

A.90%

B.95%

C.100%

D.105%

答案：C

解析：效率=10^(?1/斜率)?1=10^(1/3.32)?1≈1.0。

12.【单选】下列哪种质控图规则最先提示“系统误差”

A.1-2S

B.1-3S

C.2-2S

D.10-X

答案：C

解析：2-2S规则：连续两个质控结果同侧超出2S，提示系统偏移。

13.【单选】使用磁珠法提取200μL全血，洗脱体积50μL，提取回收率≥80%，则理论上1copies/μL的灵敏度对应原始血样中病毒载量为