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1.1无菌操作要求
1.1.1接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
1.1.2专用工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
1.1.3接种样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦洁净。
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1.1无菌操作要求
1.1.4进行接种所用吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
1.1.5从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
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1.1无菌操作要求
1.1.6接种样品、转种细菌必须在酒精灯旁操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞（即硅氟胶塞）都要经过火焰消毒。
1.1.7接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆连接处。
1.1.8吸管吸收菌液或样品时，应用对应橡皮头吸收，不得直接用口吸。
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1.2无菌间使用要求
1.2.1
无菌间内应保持清洁，工作后用消毒溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与试验无关物品。
1.2.2无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引发损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以降低紫外线穿透影响。
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1.3消毒灭菌要求
1.3.1灭菌前准备
1.2.3处理和接种样品时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可经过小窗传递。
（1）全部需要灭菌物品首先应清洗晾干，玻璃器皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
（2）装培养基三角瓶，内容物不应超出总体积2/3（比如500mL三角瓶最好装300～350mL培养基，以防再次加热融化时爆沸）。
（3）无菌室内使用毛巾、脱脂棉球用纸包裹，进行湿热灭菌。
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1.3.2装放
（1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱四壁。
（2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。
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1.3.3设备检验
（1）检验门开关是否灵活，橡皮圈有没有损坏，是否平整。
（2）检验压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示情况是否吻合，管道有没有堵塞。
（3）对有自动电子程序控制装置灭菌器，使用前应检验要求程序，是否符合于进行灭菌处理要求。
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1.3.4灭菌处理
(1)干热灭菌法：用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等灭菌。灭菌完成后或温度升温过程中，须在60℃以下才能打开箱门。
(2)立式压力蒸气灭菌器：待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应马上将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体猛烈沸腾或容器爆破。
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（3）物品取出,
随即检验包装完整性,若有破坏或棉塞脱掉、包装有显著水浸者,不可作为无菌物品使用。培养基或试剂等,应检验是否符合到达灭菌后色泽或状态,未到达者应废弃。取出物品掉落在地或误放不洁处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使用。取出合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,禁止与未灭菌物品混放。凡属合格物品,应标有灭菌日期及使用期限。
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1.4有毒有菌污物处理要求
1.4.1经培养污染材料及废弃物应放在严密容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，待统一进行高压灭菌（经微生物污染培养物，必须经121℃30min高压灭菌）。
1.4.2染菌后吸管（即进行阳性菌操作后），使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h（消毒液体不得低于浸泡高度）再经121℃30min高压灭菌。
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有毒有菌污物处理要求
1.4.3涂片染色冲洗片液体，普通可直接冲入下水道，强致病菌冲洗液必须冲在烧杯中，经高压灭菌后方可倒入下水道，染色玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24h后，煮沸洗涤。做凝集试验用玻片或平皿，必须高压灭菌后洗涤。
1.4.4打坏培养物，马上用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位，浸泡半小时后再擦拭洁净。
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有毒有菌污物处理要求
1.4.5污染工作服或进行强致病菌试验所穿工作服、帽、口罩等，应放入专用消毒袋内，经高压
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