作物育种外源基因转化方法.pptxVIP

种子生产与经营专业教学资源库《作物育种技术》外源基因的转化方法

理解遗传转化的含义熟悉农杆菌介导法的主要过程了解基因枪法的主要过程了解花粉管通道法的主要过程教学目标

种子生产与经营专业教学资源库遗传转化是指将外源基因导入受体细胞内，并整合到核基因组或质体基因组中的过程。转基因的具体方法很多，不同转化方法的转化率差异也较大。目前，发展较为成熟的方法包括：农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法以及其他转化方法如PEG法、微注射法等。

种子生产与经营专业教学资源库不同的受体系统及其转化方法细胞或组织类型转化方法直接分化再生系统农杆菌介导、基因枪等原生质体再生系统电击法、脂质体、微注射等愈伤组织再生系统基因枪、超声波等胚状体再生系统农杆菌介导、基因枪、超声波等生殖细胞受体系统花粉管通道、子房注射等

种子生产与经营专业教学资源库一、农杆菌介导法农杆菌介导法是以农杆菌为媒介对植物进行遗传转化的方法。此法具有操作简便、费用低、效率高、插入基因的拷贝数低等优点，是目前最理想的植物遗传转化方法。

叶盘消毒切取农杆菌浸泡侵染筛选培养基愈伤组织分化幼苗叶盘法

种子生产与经营专业教学资源库一、农杆菌介导法农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，是一种天然的植物遗传转化体系，能侵染多数双子叶植物和少数单子叶植物。

种子生产与经营专业教学资源库一、农杆菌介导法农杆菌介导法植物遗传转化的原理为：将克隆在Ti质粒或Ri质粒载体上的目的基因转化到农杆菌上，再借助于农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，利用细胞的全能性将转化细胞再生出转基因植株。

种子生产与经营专业教学资源库一、农杆菌介导法根癌农杆菌侵染植物后产生冠瘿瘤

种子生产与经营专业教学资源库一、农杆菌介导法发根农杆菌侵染植物后产生的毛状根产生毛状根

种子生产与经营专业教学资源库二、基因枪法基因枪法又称微弹轰击技术，是将外源DNA包裹在微小的钨粉或金粉颗粒的表面，借助高压动力射入受体细胞或组织，当微粒上的DNA进入细胞后将整合到植物基因组中并得以表达。

种子生产与经营专业教学资源库二、基因枪法优点：克服了受体材料的限制，不必制备原生质体。实验操作简单易行，适合于大多数细胞或组织，具有相当广泛的应用范围，已经成为植物细胞转化最有效方法之一。缺点：进去的DNA片段整合效率极低，遗传稳定性差，拷贝数多，不易获得再生植株。

种子生产与经营专业教学资源库二、基因枪法目前，该技术已在烟草、水稻、小麦、甘蔗、棉花、大豆、甜橙、葡萄等多种植物上获得转基因植株。基因枪法适合于大多数细胞或组织，克服了受体材料的限制，不必制备原生质体，具有相当广泛的应用范围，已经成为植物细胞转化最有效方法之一。

种子生产与经营专业教学资源库三、花粉管通道法花粉管通道法是我国生物化学家周光宇于80年代初期提出的，其主要原理是利用植物受粉后花粉萌发形成的花粉管，将外源DNA送入胚囊中尚不具备完整细胞壁的受精卵或早期胚胎细胞中。

种子生产与经营专业教学资源库三、花粉管通道法步骤：１.去除花冠;２.用微量注射器从断面沿花柱中轴插入子房长度的约１／４处，再退回２毫米左右;３.注入含外源目的基因的缓冲液;４.正常管理，收获种子,经筛选获得转基因植株。

种子生产与经营专业教学资源库三、花粉管通道法优点：适用范围广，不依赖组织培养人工再生植株；可直接获得转基因种子，育种时间短，在鉴定时可直接针对目的性状的表现型来进行，简单快捷；转化速度较快，变异性状稳定较快；方法简单，转化成本较低，不需要复杂昂贵的仪器设备。缺点：转化效率较低；适合于花器官较大的植物；在自然田间进行操作，受环境条件的影响很大。

种子生产与经营专业教学资源库三、花粉管通道法花粉管通道法在水稻、小麦、烟草等植物的遗传转化上有广泛应用，特别是棉花等多胚珠植物，中国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。

谢谢观看Thankyouforwatching