动物组织培养细胞培养的基本条件.pptVIP

3、卫生消毒制度：1）一般情况下细胞间每日消毒一次（包括两个缓冲间），方法为紫外线消毒（每次30分钟至1小时）一次，另外每周用10％乳酸在紧闭门窗下熏蒸３０分钟；2）实验完毕应及时清理所用物品，注意台面整洁；3）及时清洗所用隔离衣，并高压灭菌后存放于指定位置（每日一次）；4）除实验必须的用品外，其它物品不得带入净化室；5）层流净化室内所用仪器及附属设备均应在指定范围内使用，不得随意转移地点，以便他人顺利使用；6）层流净化室实施值日生负责制，值班人员负责检查室内是否保持清洁整齐，督促违反规定者改正错误。第30页，共50页，星期日，2025年，2月5日4、出入制度：总体原则为进出净化室应按次序开、关门，只有将前面打开的门关闭后才允许打开下一个门，出入线路绝对不能逆行，使缓冲间起到应有的作用。1）层流净化细胞培养室共有两个缓冲间，进入每个缓冲间必须更换指定消毒的拖鞋；2）穿戴好消毒的鞋、帽、口罩后不得逆行离开层流净化室；3）人流：打开细胞培养室外门，进入第一缓冲间，开灯，关闭细胞培养室外门,穿戴专用的洁净隔离衣、工作鞋帽、口罩等；打开第一缓冲间内侧门，进入第二缓冲间，新洁尔灭泡手1分钟，烘干，关闭第二缓冲间外侧门；打开第二缓冲间内侧门，进入层流净化细胞培养室,关闭层流净化细胞培养室外门。4）物流：所有进出层流净化细胞培养室的物品均应通过传递窗进行；物品进入层流净化细胞培养室时，应先打开传递窗外侧门，将物品放入传递窗，关闭传递窗外侧门，打开紫外灯照射１５分钟；人员进入层流净化细胞培养室后，关闭紫外灯，打开传递窗内侧门，取出物品；物品出室次序与以上进室次序相反，但不需紫外线照射。第31页，共50页，星期日，2025年，2月5日培养细胞生长的条件1细胞的营养需要2细胞的生存环境温度:37℃，O2CO2:5%，CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-pH:7.2-7.4渗透压3无污染4无毒第32页，共50页，星期日，2025年，2月5日细胞培养用液的配制水：新鲜配置的三蒸水或去离子水平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液PBS：NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO4.H2O1.56gKH2PO40.20加水至1000ml第33页，共50页，星期日，2025年，2月5日消化液：胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25％。用滤器过滤除菌。胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。用含血清培养液终止其对细胞的消化作用第34页，共50页，星期日，2025年，2月5日培养基：培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。第35页，共50页，星期日，2025年，2月5日第1页，共50页，星期日，2025年，2月5日净化工作室????????????????????????????????????????????????????????????????------我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准-------洁净度级别尘粒最大允许数/立方米尘粒最大允许数≥0.5um≥5um浮游菌/立方沉降菌/皿1003,50005110,000350,0002,0001003100,0003,500,00020,00050010300,00010,500,00060,000NA15第2页，共50页，星期日，2025年，2月5日第3页，共50页，星期日，2025年，2月5日风淋室:

风淋室是生物洁净室的理想配套设备，它不仅可以清除人体和物品表面附着的尘埃，减少带入洁净室的灰尘量，而且兼有气闸室的功能，可防止非洁净空气的侵入。风淋室的板壁采用轻质隔热夹芯钢板，吹淋板采用进口不锈钢制作，吹淋口方向可调，风淋时间可在30-99秒间的调整