T_CVMA 203-2024 牛冠状病毒感染诊断技术.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA203—2024

牛冠状病毒感染诊断技术

Diagnostictechniquesforbovinecoronavirusinfection

2024-12-4发布2024-12-4实施

中国兽医协会发布

I

T/CVMA203—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由青岛市动物疫病预防控制中心提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件主要起草单位：青岛市动物疫病预防控制中心、中国动物卫生与流行病学中心、青岛博霖生物科技有限公司。

本文件主要起草人：李彦、吴发兴、杨胜男、段笑笑、马帅、尹斐斐、迟田英、李博文、邴啟政、赵永达、刘枢清。

T/CVMA203—2024

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牛冠状病毒感染诊断技术

1范围

本文件规定了牛冠状病毒感染的临床诊断、样品采集与处理、病毒分离、RT-PCR、荧光RT-PCR、间接酶联免疫吸附试验技术要求。

本文件适用于肉牛、奶牛以及其他易感动物牛冠状病毒感染的诊断、检测、监测和流行病学调查等。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BCoV：牛冠状病毒（Bovinecoronavirus）

CPE：致细胞病变（Cytopathiceffect）

ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzymelinkedimmunosorbentassay)

FBS：胎牛血清（FetalBovineSerum）

HRP：辣根过氧化物酶（Horseradishperoxidase)

HRT-18细胞：人直肠肿瘤18细胞（HumanRectaltumor-18cell）

MEM：最低必需培养基（Minimumessentialmedium)

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphatebufferedsalinebuffer)

RNA：核糖核酸（Ribonucleicacid)

RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（Reversetranscription-polymerasechainreaction)

TMB：四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethyl-benzidine)

5病毒学

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牛冠状病毒属于冠状病毒科冠状病毒属的单股正链RNA病毒。成熟的病毒粒子具有多形性，基本呈球形，直径为65nm~210nm，平均直径约120nm。病毒结构形态为复合结构，最外层为囊膜，囊膜上存在较长的纤突蛋白和较短的血凝素酯酶蛋白，内部为多面体对称。

6临床诊断

6.1流行病学

6.1.1牛为自然宿主，除了感染奶牛、肉牛外，牦牛、水牛等也能感染。

6.1.2患病牛和带毒牛是本病的主要传染源。

6.1.3主要通过消化道和呼吸道传播，也可通过接触传播。

6.1.4犊牛潜伏期一般为1d~2d，成年牛为2d~3d。痊愈牛体内有该病毒抗体，可以产生长达1~3年的免疫力。但由于痊愈牛仍可在一段时间内通过鼻腔分泌物或粪便持续排毒，成为病毒携带者，易导致同舍（群）易感牛被感染。

6.2临床症状

6.2.1犊牛腹泻多发于10日龄以内的犊牛，大多数犊牛出现出血性腹泻或黄色水样腹泻，伴有粘液、进行性脱水、低温和精神沉郁，饲料摄入量不足和电解质流失还可以造成犊牛血糖降低和代谢性酸中毒。腹泻特别严重而不治疗的动物则会出现昏迷甚至死亡。

6.2.2成年牛冬季血痢主要见于产后成年奶牛，一般在冬季较为严重，特点是出现自限性水样腹泻暴发，并伴有出血性腹泻、频繁的呼吸症状、产奶量和奶品质下降，病情严重可导致贫血。

6.2.3牛冠状病毒还可以与其他多种病原体共同导致牛呼吸道综合征，临床表