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冷冻电镜下的TRiC/CCT：构象变化与亚基特异性机制解析

一、引言

1.1研究背景

蛋白质作为生命活动的主要承担者，其正确折叠对细胞的正常功能和生存至关重要。在细胞内，新生肽链需要折叠成特定的三维结构，才能行使其生物学功能，如催化化学反应、参与信号传导、维持细胞结构等。然而，蛋白质的折叠过程是一个复杂且精细的过程，受到多种因素的影响，如氨基酸序列、细胞内环境、分子伴侣等。一旦蛋白质折叠错误，就可能导致蛋白质功能丧失、聚集甚至引发疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性疾病，以及某些癌症等。因此，深入理解蛋白质的折叠机制，对于揭示生命过程的本质、预防和治疗相关疾病具有重要意义。

在真核生物中，约10%的胞质蛋白的正确折叠依赖于II型分子伴侣素TRiC/CCT（T-complexprotein1ringcomplex/chaperonincontainingTCP1）。TRiC/CCT在细胞内扮演着“分子伴侣”的角色，协助其底物蛋白克服折叠过程中的能量障碍，防止蛋白质错误折叠和聚集，确保蛋白质能够正确折叠成具有生物活性的构象。其底物包括许多细胞内的关键蛋白，如肌动蛋白actin和微管蛋白tubulin，它们是细胞骨架的重要组成部分，对于维持细胞的形态、结构和运动至关重要；肿瘤抑制蛋白VHL和p53，以及原致癌蛋白STAT3，这些蛋白在细胞增殖、凋亡、肿瘤发生等过程中发挥着关键的调控作用；细胞周期调节蛋白CDC20，参与细胞周期的调控，确保细胞分裂的正常进行。由此可见，TRiC/CCT对于维持细胞内蛋白质的动态平衡，进而调控细胞的生命过程起着不可或缺的作用。

然而，尽管TRiC/CCT在蛋白质折叠中具有重要作用，但其在ATP驱动下的完整构象变化过程和机制，以及各亚基功能特异性的结构基础仍不完全清楚。深入探索这些问题，不仅有助于阐明TRiC/CCT协助其底物正确折叠的分子机制，还能为揭示TRiC/CCT与相关人类疾病之间的关系提供理论基础，具有重要的科学意义和潜在的临床应用价值。

1.2TRiC/CCT概述

TRiC/CCT是一种存在于真核生物中的分子伴侣素，由寡聚双环背对背堆叠而成，整体呈桶状结构。每个环由8个不同但同源的亚基组成，分别为CCT1-CCT8。这些亚基在序列和结构上具有一定的相似性，但又各自具有独特的功能和特性。亚基之间通过复杂的相互作用形成稳定的环状结构，两个环之间也存在着紧密的相互作用，共同构成了TRiC/CCT的完整结构。

TRiC/CCT的主要功能是在ATP驱动下协助蛋白质折叠。当底物蛋白进入TRiC/CCT的中央腔室后，ATP结合到TRiC/CCT的亚基上，引发其构象变化。这种构象变化驱动TRiC/CCT从开放状态转变为关闭状态，将底物蛋白包裹在腔室内，为其提供一个孤立的折叠环境，避免底物蛋白与其他分子相互干扰，促进其正确折叠。在折叠过程中，ATP水解为ADP和Pi，释放的能量用于驱动TRiC/CCT的构象循环，使其能够不断地协助新的底物蛋白折叠。

TRiC/CCT在细胞的生命过程中发挥着广泛而重要的作用。在细胞生长和分裂过程中，TRiC/CCT协助合成和折叠与细胞周期调控相关的蛋白，确保细胞周期的正常进行。在细胞应激反应中，如热休克、氧化应激等条件下，TRiC/CCT的表达量会增加，以应对细胞内蛋白质折叠需求的变化，维持细胞内蛋白质的稳态。此外，TRiC/CCT还参与细胞内的信号传导通路，通过协助折叠信号传导相关的蛋白，保证信号的正常传递和细胞的正常生理功能。

1.3研究目的与意义

本研究旨在利用冷冻电镜技术，结合生化和功能分析，解析TRiC/CCT在不同核苷酸状态及浓度下的一系列高分辨率结构，以揭示其构象变化空间及亚基特异性机制。

具体而言，通过捕捉TRiC/CCT逐步关环的完整构象变化过程，明确其在ATP驱动下的构象变化路径和关键中间态，深入了解其如何将化学能转化为机械能，从而实现对底物蛋白的有效折叠。通过分析各亚基在ATP消耗和关环过程中的特异性，包括亚基结合核苷酸的顺序、构象变化的时序以及在整个复合体功能中的独特作用，揭示TRiC/CCT各亚基之间的协同工作机制。

本研究具有重要的理论意义和潜在的应用价值。在理论方面，研究成果将为深入理解TRiC/CCT协助其底物正确折叠的机制提供关键的结构和功能信息，丰富和完善蛋白质折叠领域的理论知识体系。通过揭示TRiC/CCT的构象变化空间和亚基特异性机制，有助于进一步认识蛋白质折叠过程中的能量转换、分子识别和协同作用等基本生物学过程，为研究其他分子伴侣的功能和机制提供借鉴和参考。