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液相流动相选择原则与优化策略理论与实践!

（-）液相流动相选择原则与优化策略原则1:由强到弱

一般先用90%的乙睛（或甲醇）/（或缓冲溶液）进行试验，这样可以很快地

得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂（乙睛或甲醇）的比例。原则2:

三倍规则每减少10%的有机溶剂（甲醇或乙睛）的量，保留因子约增加3倍，此

为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰

的分离情况。原则3:粗调转微调当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的

改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率，直至各绢分的分离情况不再

改变。Di.流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘

度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。选择流动相时应考虑

以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂

和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性

质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等

吸附剂的柱系统。②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关,特别是当溶

剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流

动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选

择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。④粘度要低（应

2cp）。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，

使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。⑤对样品的溶解度要

适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱

子恶化。⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。

.流动相的pH值

采用反色谱法分离弱酸3（印Ka07）或弱碱7（«pKaW8）样品时，通过

调节流动的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定上的保留，

并改善峰形的技术称为反离子抑制技术。

对于弱酸，流动的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱

酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况反。分析弱酸样

品时，通常在流动|卜加入少量弱酸，常用50nlmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋

酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷

酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

注：流动中加入有机胺可以减弱碱性溶层与残余硅醇基的强互作用，

减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾

剂或除尾剂。

（三乙胺riehylamine氨分子中的氢原子被3个乙基取代的产物。分子

式C（H3cH2）3N。易挥发的无色液体，有氨的气味。熔点-114.7C,沸点

89.3℃,对密度0.7275（20/4℃）e

溶于水和乙醇、乙醛等有机溶剂。三乙胺有碱性，与无机酸能生成易溶

于水的盐类。可由N,N-二乙基乙酰氨与氢化铝锂反应制取，也可用乙醇胺

进行气烷基化反应合成。用于制橡胶硫化促进剂、润湿剂和杀菌剂等，也

可用作溶剂和用于合成四级镀化合物。）

Q3.如何选择缓液PH值在选择缓冲液PH值之前，应先了解被分析

物的Pka,高于或低于Pka两个PH值单位的,有助于获得好的、尖锐的峰，

从HH公式：PH=Pka+log（[A-]/[A]）得知,溶液PH值高于或低于Pka两

个单位，化合物中99%以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好

的尖锐的峰。显示的是它的离子形式和中性化合