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液相色谱流动相的选择秘诀

嘉峪检测网2020-10-2015:45

秘诀1

由强到弱：一般先用90%的乙睛（或甲醇）/水（或缓冲溶液）进行试,这样可以

很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂（乙睛或甲醇）的比例。

秘诀2

三倍规则：每减少10%的有机溶剂（甲醇或乙睛）的量，保留因子约增加3倍，

此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个

峰的分离情况。

秘诀3

粗调转微调：当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整为5%,

并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

流动相的性质要求

一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到

纯品和低毒性等特征,

选择流动相时应考虑以下几个方面:

①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料

有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相

不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系

统。

②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上

积累时。

③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸

收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大

的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低（应＜2cp）。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，庄会

使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳,样品会在柱头沉淀,不但影响了

纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。

流动相的pH值

采用反相色谱法分离弱酸3（wpKa7威弱碱7（wpKa48）样品时，通过调节流动

相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相的保留，并改善峰

形的技术称为反相离子抑制技术。

对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的

pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱J青况相反。分析弱酸样品时，

通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶

液；分析弱碱样品时,通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐

缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻

或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾

剂。

(三乙胺triethylamine氨分子中的氢原子被3个乙基取代的产物。分子式

(CH3CH2)3NO易挥发的无色液体,有氨的气味。熔点-114.7工，沸点

89.3℃,相对密度0.7275(20/4。。。溶于水和乙醇、乙醛等有机溶剂。三乙胺

有碱性，与无机酸能生成易溶于水的盐类。可由N,N-二乙基乙酰氨与氢化铝

锂反应制取，也可用乙醇胺进行气相烷基化反应合成。用于制橡胶硫化促遂

剂、润湿剂和杀菌剂等，也可用作溶剂和用于合成四级镀化合物。)

如何选择缓冲液pH值

在选择缓冲液pH值之前，应先了解被分析物的ka,高于或低于ka两个

pH值单位的,有助于获得好的、尖锐的峰，从pH公式：

pH=ka+log([A-]/[A])得知，溶液pH值高于或低于ka两个单位，化合物中

99%以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。

显示的是它的离子形式和中性化合物的转变，苯甲酸的ka等于4.2,理论

由pH公式得知，当溶液H值等于2.2时，99%的苯甲酸以中性化合物存

在，pH值等于6.2时99%的笨甲酸以离子形式存在，所以当缓冲液pH值等

于2.2时,中性化合物以竣酸形式保留于反相柱。

当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在pH值

小于9时都被质子化，所以所有pH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许

会问水的pH值大约是I,为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的

可靠性，以及色