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病原微生物实验室生物安全操作技术规范

一、实验室分级与基本要求

根据病原微生物的传染性、感染后对个体或群体的危害程度，实验室生物安全防护水平（BSL）分为1至4级（BSL-1至BSL-4），各级实验室需满足对应生物安全要求：

（一）BSL-1实验室

适用于操作已知无或极低个体/群体危害的微生物。实验室应保持清洁整齐，实验台面应耐酸、碱、有机溶剂腐蚀；配备洗手池（靠近出口）、应急冲淋装置（若使用腐蚀性物质）；实验区与办公区分离，门可自动关闭；禁止饮食、吸烟、存放食物；操作时穿戴实验室服、手套，必要时佩戴护目镜；实验结束后需对台面、设备进行清洁消毒（75%乙醇或等效消毒剂）。

（二）BSL-2实验室

适用于操作能够引起人类或动物疾病，但一般不导致严重危害，传播风险有限，有有效预防和治疗措施的微生物。除满足BSL-1要求外，需增设生物安全柜（Ⅱ级及以上），并确保其位置远离门窗、人员流动频繁区域；配备高压蒸汽灭菌器（定期进行生物监测，使用生物指示剂验证灭菌效果）；实验室入口处设生物危害标识、操作须知及进入限制标识；实验室内应安装自动闭门装置，有可靠的电力供应；操作感染性材料时必须在生物安全柜内进行，禁止在开放实验台上操作；涉及气溶胶或飞溅操作（如离心、匀浆、超声）时，需额外采取防护措施（如使用密封离心管、防溅罩）。

（三）BSL-3实验室

适用于操作能够引起人类或动物严重疾病，较易发生个体间传播，有有效预防和治疗措施的微生物。实验室需设置独立的工作区域，与其他区域通过缓冲间隔离（缓冲间门互锁）；实验区与缓冲间、清洁区之间保持定向气流（从清洁区→缓冲间→实验区），压差应≥-10Pa（以清洁区为参照）；配备Ⅲ级生物安全柜或Ⅱ级生物安全柜（需连接排风系统）；实验室入口处设可视报警装置（提示压差异常）、人员进入记录系统；操作人员需穿戴正压防护服（或连身式防渗透防护服+呼吸防护装备），离开实验区前需在缓冲间进行外层防护服脱卸并消毒；所有实验废弃物（包括废弃样本、一次性器材）需经双扉高压灭菌器（一端在实验区，另一端在清洁区）灭菌后移出；实验室内设洗眼器和应急淋浴装置（位置与生物安全柜保持至少1米距离）。

（四）BSL-4实验室

适用于操作能够引起人类或动物非常严重疾病，在缺乏预防和治疗措施的情况下易发生气溶胶传播的微生物。实验室需为独立建筑或与其他建筑完全隔离的区域，采用密封结构（墙、顶、地面无裂隙，表面耐化学腐蚀）；配备生命支持系统（包括独立供气、应急氧气储备），操作人员必须穿戴正压供气式防护服（防护服内压力需高于实验室环境5-10Pa），防护服供气系统与实验室排风系统连锁（排风故障时自动切断供气）；实验区与外部通过三级缓冲间隔离（每级缓冲间门互锁），进入实验区需经过强制淋浴（出实验室时）；所有物料（包括样本、器材）需通过传递舱（双门互锁，配备内层消毒装置如过氧化氢熏蒸）进出；实验室排风需经高效空气过滤器（HEPA）两次过滤（串联），过滤效率≥99.995%（针对0.3μm颗粒），排风口需高于建筑顶部2米以上并远离新风入口；实验室内设24小时监控系统（包括视频、环境参数、人员活动），数据至少保存1年。

二、个人防护装备（PPE）使用规范

（一）选择与穿戴

1.防护服：BSL-1/2实验室使用一次性防渗透连体服或分体服（袖口、脚踝处收紧）；BSL-3/4实验室使用正压供气式防护服（需定期检测气密性，每年至少1次）或全封闭连身式防护服（内层需穿一次性防渗透内衣）。

2.手套：根据操作风险选择无粉乳胶手套（厚度≥0.1mm）或丁腈手套（耐化学腐蚀）；BSL-3及以上实验室需戴双层手套（内层为薄型检查手套，外层为厚型操作手套），手套需覆盖防护服袖口5cm以上；接触过感染性材料后，需及时更换手套（脱卸前用75%乙醇喷洒表面）。

3.口罩与呼吸防护：BSL-2实验室操作可能产生气溶胶时，佩戴N95及以上级别医用防护口罩；BSL-3实验室需使用动力送风过滤式呼吸器（PAPR）或全面罩空气过滤呼吸器（防护因数≥1000）；BSL-4实验室依赖正压防护服内置供气系统（供气流量≥40L/min）。

4.护目镜/面罩：所有涉及液体操作（如移液、离心）或可能发生飞溅的实验，需佩戴防雾护目镜（镜片与面部贴合无间隙）；BSL-3及以上实验室需使用全面罩（覆盖面部、颈部），与防护服密封连接。

5.鞋套：BSL-2及以上实验室需穿戴一次性防渗透鞋套（覆盖至脚踝以上），或使用专用实验鞋（不得穿出实验室）。

穿戴顺序：先穿内层防护（如内衣），再穿防护服（拉好拉链，密封颈部），戴内层手套（手套口塞入防护服袖口），戴呼吸防护装备（调整头带至贴合），戴护目镜/面罩（确保无漏光），穿外层手套（覆盖防护服袖口），