单细胞藻类微吸管分离实验步骤.docxVIP

实验单细胞藻类的分离（一）微吸管分离法

一．?实验目的：

藻类在自然界中与其他生物杂居在一起，在研究工作中。常常需要把它们和其他生物，特别是其他藻类分开，进行单种或纯种培养，这叫分离。本实验的目的是使学生熟悉单细胞藻类的微吸管法分离技术。

二．?实验器材：

解剖镜，显微镜，凹玻片，载玻片，大盖片，喷灯，砂轮，细玻管，橡皮头，培养皿，无菌培养液，待分离藻种。

三、方法与步骤：

1、拉制微吸管：用砂轮将孔径3—4mm玻璃管载成35—40mm的段。浸入浓HCL（或HNO3）溶液中洗去污物。先用自来水，后用蒸馏水洗净烘干。然后点燃喷灯，两臂加紧，手持玻璃管在火焰上烧灼其中部一面烧一面转一面。使其受热均匀。待玻璃管烧红软化后稍向上提，两手均匀用力。向相反方向拉引。将中段拉长约6—10cm。使这段孔径约为0

使用前将吸管在酒精灯上加热，用镊子夹住细头部拉成孔径约0.1mm的微吸管，尾部套上橡皮头或孔胶管备用，如进行纯种（无菌）培养，微吸管需经灭菌。为了防止擦伤藻体，微吸管头部可在酒精灯上烧灼圆滑。

2、分离：首先镜检待分离藻液，如浓度过大应予以稀释，一般以每小滴藻液中含5—10个藻细胞为宜。

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在一已灭菌后的清洁载片上滴加9滴消毒培养液，方法如上图。另取一载玻片滴一滴稀释的待分离藻液，在解剖镜（或显微镜）下用微吸管吸取其中所需的藻体（最好是1个，也可以是多个2—5个）放入第一滴水中，用一干燥的吸管洗（从一边吹水滴，使藻体在水中旋转，均匀）。然后换一干净的微吸管从第一滴水中吸一个（或数个）藻细胞，放入第二滴水中，清洗，依次而下，直至水滴中含一个藻细胞。（清洗是为了洗去藻体上附有的细菌，进行无菌培养）。用微吸管将此单个藻细胞转移到滴有培养液的盖玻片上，将盖玻片在凹玻面上进行悬滴培养。每天数次观察藻体分裂情况。如繁殖良好，可以扩大培养成纯（单）种。

扩大后的培养液镜检为单种时，分离成功。

注意：

1、培养液配方根据待分离藻种的不同选择，一般用F/2配方。

2、此微吸管所形成的小滴以显微镜低倍镜一个视野能全看到为宜。但又不能太小，以免很快干掉。

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四、报告与讨论：

1、在分离中需要注意哪些问题？

2、怎样才能熟练掌握分离技术？