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实验单细胞藻类浓度的测定

一、实验目的：

1、熟悉饵料微生物的定量方法。

2、??掌握血球计数板的使用，学会正确定量饵料微生物的浓度。

二、血球计数板的原理和构造：

血球计数板由一块特殊规格的载玻片特制而成。板的中央透明区一般由一H形沟分成两块。每一块即是一计数池。每个计数池上分别刻有准确面积的大、中、小方格。一般每个计数池被分成九个大方格。每个大方格的面积为1平方毫米。计数池两侧的凸起部分与计数池之间有0.1毫米的高程差。因此，当在计数池上方加盖盖玻片时，盖玻片下每个大方格区域内的体积为0.1立方毫米。计数池中央的大格又被双线划分成25个中格，其中的每个中格又被单线划分成16个小格（也有一类计数板的每一个中央大格先分成16个中格，每个中格分成25个小格）。因此，在中央大格内，1平方毫米被均匀分成16*25（即400）等份。计数时，当样品用细口滴管滴加到计数池后，通常计数中央大格的五个中格内的细胞数，即可推算出整个中央大格内的细胞数，即0.1立方毫米的细胞数。由此可推算每毫升内饵料生物的浓度。

三、实验器材：

1、器材

光学显微镜，血球计数板，盖玻片，计数器，5毫升量筒，1毫升移液管，细口胶头吸管，擦镜纸，吸水纸，消毒海水，鲁哥氏碘液，纱布。

2、样品

小球藻，扁藻

四、方法与步骤：

1、将盖玻片和计数板用擦镜纸擦拭干净，将盖有盖玻片的计数板放在显微镜的载物台上，调焦，用低倍镜仔细观察计数池的结构。

2、将计数板连同盖玻片一起取下，用细口胶头滴管吸取摇匀的藻液，迅速将吸管尖靠在计数池上盖玻片的边缘，略挤胶头滴管使藻液进入盖玻片下，直至充满整个空间，多余的藻液会流入H形的凹沟中。注意，当藻液浓度高时为了便于计数，可将藻液稀释后进行计数。在计数有鞭毛或有运动性的藻类时，可先吸取定量的藻液，滴加鲁哥氏碘液进行固定，然后添加消毒海水稀释后计数。

3、样品添加到计数池后，静置片刻。在显微镜下仔细调焦，同时调节光栅，必要时调节光源和反光镜角度，直至细胞和纵横格线都清楚。

4、统计计数池中央大方格内四角及中央中格内的饵料生物的数量。并记录。计数时，小心移动载物台，从上到下，由左及右又由右及左依次计数各小格内的细胞数。凡压方格的上线和左线的细胞，统一算此方格内的细胞，而压方格的下线和右线的细胞，统一不算此方格内的细胞。

5、将计数板及盖玻片用流水冲洗，擦干，重复上述步骤，对同一样品再计数2-3次。

6、将同一样品的计数结果，取平均值。代如下式，求算单胞藻的密度：

单胞藻密度（个/ml）=平均每小格内的细胞数*16*25*10000*稀释倍数

7、计数完毕，将血球计数板冲洗干净，用纱布吸干水分，用擦镜纸包装后连同盖玻片一起放入原盒子内。

五、报告与数据处理：

1、?将原始记录连同计数结果，填写实验报告。

2、?样品滴加到计数池后，为什么要静置片刻后才计数？