实验一细胞形态细胞器的显微结构的观察讲课文档.pptVIP

实验一细胞形态细胞器的显微结构的观察;一、实验目的;二、实验原理;经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。

;显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力有关。

制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。

普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于0.2μm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。;;在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：

物镜镜口率(N.A.)工作距离(mm)

10×0.255.40

40×0.650.39

100×1.300.11

显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，

公式为:M=K1xK2

焦点深度:显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的

上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全

厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。;厚标本和薄标本;基础知识;2.体视显微镜（可直接进行解剖及观察并具有正像立体感）;;荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：;;

5.暗视野显微镜

暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。

6.相差显微镜

;7.偏光显微镜（对于双折射物质进行结构研究）

偏光显微镜（polarizingmicroscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。

8.微分干涉差显微镜（图像具有浮雕感）

DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。;;10.显微操作技术;四、实验用品;;瞳距调节;屈光度调节;粗调松紧调节旋钮;聚光镜中心调节;孔径光栏调节;孔径光栏开度与图象;孔径光栏的运用;操作步骤如下:

(1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。

(2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最均匀的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。

(3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变光栏关小，看其亮点是否在视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到视野中央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜的边缘相接为止。;3.观察操作：

(1)低、高倍镜的使用:先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜，然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。

;(2)兔肝细胞苏木精-伊红(H·E·)染色玻片标本的观察

先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数量，细胞核和细胞质的染色区别等。;（二）观察标本;第三十一页，共35页。;第三十二页，共35页。;第三十三页，共35页。;第三十四页，共35页。;谢谢大家！