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显微镜使用实验步骤报告

一、实验名称

光学显微镜的规范操作与使用

二、实验目的

1.熟悉光学显微镜的基本构造及各主要部件的功能。

2.掌握显微镜的正确取放、调试、观察及维护保养方法。

3.初步学会使用低倍镜、高倍镜进行生物标本的观察，能辨别基本的显微结构。

4.培养严谨的实验操作习惯和细致的观察能力。

三、实验原理

光学显微镜主要利用凸透镜的成像原理，通过物镜和目镜的两次放大，将微小物体形成放大的虚像，使人眼能够观察到。物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积即为显微镜的总放大倍数。其核心在于光线通过标本后，经物镜折射形成倒立放大的实像，该实像再经目镜折射，最终形成倒立放大的虚像被人眼感知。调节焦距（粗准焦螺旋和细准焦螺旋）可使不同厚度的标本清晰成像，调节光圈和反光镜（或光源亮度）可控制视野的明暗，以获得最佳观察效果。

四、实验器材与试剂

1.器材：光学显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、吸水纸、擦镜纸、待观察生物标本（如洋葱表皮细胞临时装片、口腔上皮细胞临时装片或永久装片）。

2.试剂：清水、生理盐水（视标本类型而定）、稀碘液（或其他染色剂，视标本类型而定）。

五、实验步骤

（一）实验前准备

1.显微镜的取放：

*取镜时，一手握住镜臂，另一手托住镜座，保持镜身直立平稳，避免单手提取或剧烈晃动，防止部件松动或损坏。

*将显微镜放置在实验台偏左位置，镜臂朝向自己，距实验台边缘约一拳距离，以便操作和观察，同时避免显微镜坠落。

2.环境与光源检查：确保实验台面整洁，光线适宜。若为自带光源显微镜，检查电源连接是否正常；若为反光镜式，则调整反光镜，使其对准光源，获取明亮且均匀的视野。

（二）显微镜的调试

1.对光：

*打开电源开关（若为自带光源），调节光源亮度旋钮至适中亮度（过亮不仅刺眼，也可能影响观察效果或损伤某些敏感标本）。

*转动转换器，使低倍物镜（通常是10×物镜，镜头最短或其上标有“10×”字样）对准通光孔中央。注意转换物镜时应直接转动转换器，而非扳动物镜镜头。

*调节遮光器，选择较大的光圈对准通光孔，以增加进光量。

*左眼注视目镜内（右眼应自然睁开，便于同时进行绘图或记录），缓慢转动反光镜（平面反光镜适用于强光，凹面反光镜适用于弱光），直至视野内呈现明亮均匀的圆形光斑为止。

2.视野亮度与清晰度初步调节：在放置标本前，通过调节光圈大小和光源亮度，预设一个合适的初始亮度。

（三）标本放置与初步观察

1.放置标本：将待观察的玻片标本放在载物台上，用压片夹轻轻固定玻片的两端。确保标本正对通光孔的中心位置，以便观察。

2.低倍镜观察：

*从侧面注视物镜与玻片之间的距离，同时缓慢转动粗准焦螺旋，使载物台缓缓上升（或镜筒缓缓下降），直至低倍物镜镜头接近玻片标本（注意不要触碰，一般留有约0.5厘米的间隙，具体以能清晰观察到物象为准）。

*左眼从目镜内观察，同时反向缓慢转动粗准焦螺旋，使载物台缓缓下降（或镜筒缓缓上升），直至视野中出现模糊的物象轮廓。

*转动细准焦螺旋，微调焦距，使物象达到最清晰状态。此时，可根据观察需求，再次微调遮光器或反光镜（光源亮度），以获得最佳对比度和清晰度。

*移动玻片标本，利用载物台上的推进器（若有）或用手轻推玻片（注意不要触碰镜头），寻找标本中最具代表性或需要重点观察的区域，将其移至视野中央。

（四）高倍镜观察

1.转换高倍镜：在低倍镜下找到清晰的观察目标并将其移至视野中央后，直接转动转换器，将高倍物镜（如40×物镜）对准通光孔。转换过程中动作应轻柔，若感觉阻力较大，切勿强行转动，应检查物镜是否已卡紧或是否有异物阻碍。

2.调焦与亮度调节：转换至高倍镜后，视野通常会变暗，且物象可能不够清晰。此时，首先应调节遮光器，换用较大的光圈，或适当调高光源亮度，以增加视野亮度。

*然后，左眼注视目镜，缓慢转动细准焦螺旋进行微调（注意：高倍镜观察时严禁使用粗准焦螺旋！），直至物象清晰。由于高倍镜下镜头与玻片距离很近，使用粗准焦螺旋极易压碎玻片并损坏镜头。

3.观察与记录：仔细观察高倍镜下的物象细节，可轻微移动玻片，观察不同区域的结构。如有需要，可进行绘图或文字描述记录。

（五）油镜观察（若实验需要）

1.准备与转换：在高倍镜观察的基础上，若需使用油镜（如100×物镜），则在标本待观察区域的盖玻片上滴加一滴香柏油。

2.转动转换器，使油镜镜头浸入香柏油中，确保镜头与油滴充分接触，但避免用力压挤。

3.调焦与观察：如同高倍镜操作，调节光源至最亮，缓慢转动细准焦螺旋进行调焦，直至物象清晰。观察完毕后，应先将载物台下降（或镜筒上升），再小心移开油镜。

4.清洁：立即用擦镜纸蘸取少量乙醚酒精混合液（