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内容提要:●DNA的半保留复制●与DNA复制有关的物质●DNA的复制过程(大肠杆菌为例)●DNA复制的几种主要方式●真核生物中DNA的复制特点1、定义:由亲代DNA生成子代DNA时,每个新形成的子代DNA中,一条链来自亲代DNA,而另一条链则是新合成的,这种复制方式称半保留复制。(二)与DNA复制有关的物质1、原料:四种脱氧核苷三磷酸(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)2、模板:以DNA的两条链为模板链,合成子代DNA3、RNA引物:DNA的合成需要一段RNA链作为引物4、引物合成酶(引发酶):此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物(Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。5、DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶(1)都以dNTP为底物。(2)都需要Mg2+激活。(3)聚合时必须有模板链和具有3’-OH末端的引物链。(4)链的延伸都方向为5→3。6、DNA连接酶(1967年发现):若双链DNA中一条链有切口,一端是3’-OH,另一端是5‘-磷酸基,连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键,而使切口连接。但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用7、DNA拓扑异构酶(DNATopisomerase):主要功能是消除DNA解链过程中所产生的扭曲力。拓扑异构酶?:使DNA一条链发生断裂和再连接,作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区,同转录有关。

例:大肠杆菌中的ε蛋白拓扑异构酶Π:该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA,作用是将负超螺旋引入DNA分子。同复制有关。例:大肠杆菌中的DNA旋转酶8、DNA解链酶(DNAhelicase)通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。E.coli中的rep蛋白就是解链酶,还有解链酶I、II、III。9、单链结合蛋白(SSB蛋白):稳定已被解开的DNA单链,阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。(三)DNA的复制过程(大肠杆菌为例)双链的解开RNA引物的合成DNA链的延伸切除RNA引物,填补缺口,连接相邻的DNA片段DNA的半不连续复制(semi-discontinuousreplication)DNA复制时其中一条子链的合成是连续的,而另一条子链的合成是不连续的,故称半不连续复制。在DNA复制过程中,前导链能连续合成,而滞后链只能是断续的合成5??3?的多个短片段,这些不连续的小片段称为冈崎片段。转录一、基本概念在细胞核内,以DNA的一条链为模板,按照碱基互补配对原则合成一条与DNA链互补的RNA单链的过程。参与转录的物质原料:NTP(ATP,UTP,GTP,CTP)模板:DNA酶:RNA聚合酶其他蛋白质因子转录的不对称性:在RNA的合成中,DNA的二条链中仅有一条链可作为转录的模板,称为转录的不对称性。转录单元(transcriptionunit)二、参与转录起始的关键酶与元件(一)RNA聚合酶(RNApolymerase)大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析●真核生物RNA聚合酶RNA聚合酶与DNA聚合酶的区别(二)启动子(promoter)●原核生物启动子结构典型启动子的结构-35-10转录起点TTGACA16-19bpTATAAT5-9bp原核生物不同基因的启动子的共同特点:1)结构典型,都含有识别(R),结合(B)和起始(I)三个位点;2)序列保守,如-35序列、-10序列结构都十分保守;3)位置和距离都比较恒定;4)对RNA聚合酶的亲和力高低影响转录频率和效率;5)常和操纵子相邻;6)都在其控制基因的5’端;7)决定转录的启动和方向。●真核生物启动子启动子Ⅱ最为复杂,它和原核的启动子有很多不同真核生物启动子的结构1、核心启动子●定义:指保证RNA聚合酶Ⅱ转录正常起始所必需的、最少的DNA序列,包括转录起始位点及转录起始位点上游TATA区2、上游启动子元件●包括CAAT盒(CCAAT)和GC盒(GGGCGG)等真核生物启动子与原核的启动子的区别:1)多种元件:TATA框,GC框,CAAT框,OCT等;2)不同元件的组合情况:位置、序列、距

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