第四章第二节分光光度计的操作与使用.pptVIP

例4-1用氯霉素（分子量为323.15）纯品配制100mL含2.00mg的溶液，使用1.00cm的吸收池，在波长为278nm处测得其透射率为24.3%，试计算氯霉素在278nm波长处的摩尔吸光系数和比吸光系数。解：已知λ=278nmM=323.15g/molc=2.00×10-2T=24.3%（三）、吸光系数第30页，共59页，星期日，2025年，2月5日(四)、吸收光谱第31页，共59页，星期日，2025年，2月5日不同浓度KMnO4溶液的吸收光谱（五）、吸收光谱第32页，共59页，星期日，2025年，2月5日一、定性分析1.光谱对照同样条件下测定待测物和标准物的吸收光谱，如果两者吸收光谱一样，可认为是同一物质。如无标准物，也可比较标准谱图集里的光谱。第33页，共59页，星期日，2025年，2月5日2.特征数据比较最大吸收波长λmax和吸光系数，是用于定性鉴别的主要光谱数据。3.吸光度比值的比较有些物质的光谱上有几个吸收峰，可在不同的吸收峰（谷）处测得吸光度的比值作为鉴别的依据。一、定性分析第34页，共59页，星期日，2025年，2月5日二、定量分析定量分析的依据是1.单一组分的测定（1）吸光系数法查得吸光系数后根据吸光度求得样品浓度第35页，共59页，星期日，2025年，2月5日例4-5已知维生素B12在361nm处的吸光系数为20.7。精密称取样品30.0mg，加水溶解后稀释至1000mL，在该波长处用1.00cm吸收池测定溶液的吸光度为0.618，计算样品溶液中维生素B12的质量分数。解：已知A=0.618a=20.7l=1.00cm由A=alc样品中维生素B12含量为二、定量分析第36页，共59页，星期日，2025年，2月5日1.单一组分的测定（2）标准比对法相同条件下，分别配制待测溶液X和标准溶液S，并分别测定吸光度。根据郎伯-比尔定律，可写出二、定量分析第37页，共59页，星期日，2025年，2月5日例4-6为测定维生素B12原料药含量，准确称取试样25.0mg，用蒸馏水溶解后，定量转移至1000ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度后，摇匀。另称取同样重量的B12标准品，用蒸馏水溶解后，稀释至1000ml，摇匀。在361nm波长处，用1cm比色皿分别测得样品溶液和标准品溶液的吸光度分别为0.512和0.518。求试样中B12的百分含量。解：已知Ax=0.512As=0.518两溶液配制、稀释方法一致二、定量分析第38页，共59页，星期日，2025年，2月5日1.单一组分的测定（3）标准曲线法用标准曲线法测铁的浓度为例：①配一系列浓度的标准铁溶液，依次测定吸光度②作c-A图，即标准曲线三磺基水杨酸合铁配合物波长420nm③将待测溶液吸光度AX代入标准曲线，读出浓度二、定量分析第39页，共59页，星期日，2025年，2月5日2.多组分的测定当溶液内有两个及以上组分并需测得各自含量时，就是多组分的测定。（1）吸收光谱互不重叠（2）吸收光谱部分重叠（3）吸收光谱相互重叠二、定量分析第40页，共59页，星期日，2025年，2月5日2.多组分的测定（1）吸收光谱互不重叠此种情况下可以按单组分测定的方法分别求得各个组分浓度二、定量分析第41页，共59页，星期日，2025年，2月5日2.多组分的测定（2）吸收光谱部分重叠例如右图，可先在无干扰处λ2求得a的浓度，再求得b的浓度依次求得a和b的浓度λ2处：λ1处：二、定量分析第42页，共59页，星期日，2025年，2月5日2.多组分的测定（3）吸收光谱相互重叠解方程组法,如右图λ1处：λ2处：12解方程组可得：二、定量分析第43页，共59页，星期日，2025年，2月5日2.多组分的测定（3）吸收光谱相互重叠等吸收双波长消去法例如右图，选取两个波长，a物质在这两波长处的吸光度相同λ1处：λ2处：二、定量分析第44页，共59页，星期日，2025年，2月5日**第四章第二节分光光度计的操作与使用第1页，共59页，星期日，2025年，2月5日可见分光光度法可见分光光度法是利用测量有色物质对某一单色光的吸