肽链的部分水解和肽段的分离部分酸水解测定蛋白质的氨基酸组成.pptVIP

①溴化氰水解法：专一性地切断肽链中由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。专一性强，切点少且产率高，片段较大。（3）肽链的部分水解和肽段的分离②部分酸水解：测定蛋白质的氨基酸组成，稀酸条件下，肽链Asp的羧基端易断裂，浓酸条件下，含羟基氨基酸的氨基端肽键易断裂。③酶解法：胰蛋白酶：作用Arg和Lys羧基端肽键；胰凝乳蛋白酶：芳香族氨基酸及一些有大的非极性侧链的氨基酸的羧基端肽键。（4）肽段的氨基酸序列测定采用Edman降解法、酶解法等。酶解法：利用一种酶水解产生一个或两个可知末端特征的片段，再用另一种酶作用产生另一组片段，然后后一组片段进行色谱分离并进行末端测定，最后进行片段重叠分析，确定氨基酸序列。（5）肽段在多肽链中次序的推断采用肽段重叠法。利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。氨基酸组分分析Sanger反应测定N-端氨基酸Edman反应测定氨基酸序列末端分析氨基酸组分分析末端氨基酸测定还原二硫键用两种以上方法将蛋白裂解成短肽测定短肽序列短肽序列拼装胰蛋白酶溴化氰片段重叠法练习题有一多肽经酸水解后产生等摩尔的Lys，Gly和A1a，如用胰蛋白酶水解该肽，仅发现有游离的Gly和一种二肽。下列多肽的一级结构中，哪一个符合该肽的结构?A.Gly-Lys-Ala-Lys-Gly-AlaB.Ala-Lys-GlyC.Lys-Gly-AlaD.Gly-Lys-AlaE.Ala-Gly-Lys练习题一个七肽，经分析氨基酸组成是:Lys,Pro,Arg,Phe,Ala,Tyr和Ser，此多肽与DNFB不反应。经胰凝乳蛋白酶处理后，断裂成两个肽段，其氨基酸组成分别为Ala,Tyr,Ser和Pro,Phe,Lys,Arg。这两个肽段与DNFB反应，可分别产生DNP-Ser和DNP-Lys。此肽与胰蛋白酶反应，同样能生成两个肽段，它们的氨基酸组成分别是Arg,Pro和Phe,Tyr,Lys,Ser,Ala。试问此七肽的结构是怎样的?二、蛋白质的空间结构1.概念——蛋白质的空间结构系非共价结构（1）含义：二级结构：指肽链借助氢键排列成沿一个方向具有周期性结构的构象，不涉及氨基酸残基的侧链构象。三级结构：指多肽链借助各种次级键盘绕成特定的不规则的球状结构的构象。四级结构：指寡聚蛋白质中各亚基之间排布上的相互关系或结合方式。在蛋白链中，羰基和氨基具有形成氢键的潜能，蛋白质链内和链间氢键促使蛋白质形成一些规则的折叠单元，即所谓的二级结构。（2）维持蛋白质分子构象的化学键①氢键：主要维持?-螺旋和?-折叠结构。②静电引力：也称离子键或盐键，对蛋白质构象稳定性贡献不大。③范德华力：对维持蛋白质活性中心构象非常重要。④疏水相互作用：维持蛋白质高级结构；⑤二硫键：两个硫原子之间形成的共价键。维持蛋白质构象的化学键主要是次级键。次级键：除共价键、离子键和金属键外基团间和分子间相互作用力的总称。肽平面两个旋转角：φ（C?-N）、ψ（C?-C）氨基酸残基侧链结构、极性造成空间位阻，使旋转角度不能超过0~±180°范围；C=O和N-H间的氢键也限制了二者的旋转。（3）蛋白质分子中肽链的空间结构原则2.二级结构——肽链的螺旋折叠（1）?-螺旋(?-helix)1951年Pauling和Corey根据?-角蛋白(?-keratin)的X射线衍射结果提出的。①?-螺旋结构模型要点：a.主链围绕中心轴螺旋上升，每3.6个氨基酸残基上升一圈，相当于0.54nm，每个氨基酸残基沿轴上升0.15nm，每个氨基酸旋转100°。b.相邻螺圈之间形成链内氢键；c.R侧链在螺旋的外侧；d.天然蛋白质绝大多数为右手螺旋。?-螺旋?-螺旋②影响?-螺旋形成和稳定的因素a.氨基酸的组成和排列顺序多聚丙氨酸（?-螺旋）多聚赖氨酸（无规则卷曲）遇到脯氨酸螺旋被中断或拐弯。b.氨基酸所带电荷性质c.R侧链的大小：空间位阻。①β-折叠结构要点a.肽链几乎是完全伸展的；b.肽链成锯齿状，按层平行排列，肽平面呈片状；c.相邻肽链的C=O与N-H形成氢键，氢键几乎垂直于肽链；d.肽链的R侧链基团在肽平面的上下交替出现；e.折叠片以反平行式结构更稳定。②β-折叠与?-螺旋的转变：头发中的角蛋白。（2）β-折叠(β-pleatedsheet)反平行式平行式（3）?-转角(?-turn)指肽链出现的180o回折，由弯曲处的第一个氨基酸残基的-C=O与第四个氨基酸残基的-NH之间形成氢键。Gly和Pro出现频率高。（4）无规则卷曲：没有确定规律性的部