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天津市pcr上岗证考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.实时荧光定量PCR中，Ct值的定义是（）

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物浓度达到平台期的循环数

C.引物与模板结合的最适温度

D.荧光信号首次检测到的时间点

答案：A

2.以下哪种物质不会对PCR反应产生抑制作用？（）

A.血红蛋白

B.牛血清白蛋白（BSA）

C.EDTA

D.胍盐

答案：B

3.PCR实验室扩增区（二区）的主要功能是（）

A.样本接收与处理

B.核酸提取与纯化

C.PCR反应体系配置

D.PCR扩增反应

答案：D

4.引物设计时，为避免引物二聚体形成，应重点关注（）

A.引物长度（18-25bp）

B.引物3’端碱基互补性

C.引物GC含量（40%-60%）

D.引物Tm值（55-65℃）

答案：B

5.核酸提取过程中，若使用磁珠法，洗涤步骤的主要目的是（）

A.裂解细胞释放核酸

B.去除蛋白质、盐离子等杂质

C.使核酸与磁珠结合

D.浓缩核酸溶液

答案：B

6.实时荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料的作用是（）

A.特异性结合目标DNA序列

B.非特异性嵌入双链DNA发出荧光

C.标记引物用于信号检测

D.稳定PCR反应体系

答案：B

7.PCR实验室污染防控中，最有效的避免扩增产物污染的措施是（）

A.每日紫外线照射实验室

B.分区操作并严格遵循单向流程

C.使用带滤芯的吸头

D.定期更换实验服

答案：B

8.某样本核酸提取后，OD260/OD280比值为1.2，可能的原因是（）

A.核酸浓度过高

B.蛋白质污染

C.苯酚残留

D.RNA污染

答案：B

9.TaqDNA聚合酶的最适反应温度是（）

A.55℃

B.72℃

C.95℃

D.60℃

答案：B

10.以下关于PCR质量控制的描述，错误的是（）

A.阴性对照应无扩增曲线

B.阳性对照Ct值应在设定范围内

C.内参基因用于验证样本核酸提取效率

D.标准曲线斜率绝对值应大于3.8

答案：D

11.核酸提取时，若样本为全血，常用的抗凝剂是（）

A.肝素

B.EDTA-K2

C.枸橼酸钠

D.草酸钾

答案：B

12.实时荧光定量PCR结果判读时，若样本Ct值大于35且无明显扩增曲线，应（）

A.直接判定为阴性

B.重复实验并增加模板量

C.判定为弱阳性

D.无需处理

答案：B

13.PCR反应体系中，dNTP的主要作用是（）

A.提供DNA合成的原料

B.稳定反应体系pH值

C.激活Taq酶活性

D.结合金属离子

答案：A

14.实验室发生样本泄漏时，应立即使用的消毒剂是（）

A.75%乙醇

B.10%次氯酸钠

C.0.5%过氧乙酸

D.3%双氧水

答案：B

15.引物Tm值的计算公式（Wallace法）为（）

A.Tm=4(G+C)+2(A+T)

B.Tm=69.3+0.41(G+C)-650/L

C.Tm=2(A+T)+4(G+C)

D.Tm=81.5+0.41(G+C)-500/L

答案：C

16.以下哪种物质可用于消除PCR反应中的气溶胶污染？（）

A.核酸酶（DNase/RNase）

B.紫外线（254nm）

C.蛋白酶K

D.异丙醇

答案：B

17.核酸提取后，若需长期保存（-80℃），应使用的缓冲液是（）

A.TE缓冲液（pH8.0）

B.生理盐水

C.双蒸水

D.70%乙醇

答案：A

18.实时荧光定量PCR中，绝对定量的实现需要（）

A.内参基因

B.标准品梯度稀释

C.熔解曲线分析

D.阳性对照

答案：B

19.PCR实验室一级防护屏障不包括（）

A.生物安全柜

B.实验服

C.手套

D.实验室通风系统

答案：D

20.某PCR扩增产物电泳后出现多条非特异性条带，可能的原因是（）

A.引物浓度过低

B.退火温度过低

C.dNTP浓度过低

D.Taq酶量不足

答案：B

二、判断题（每题1分，共10分）

1.PCR实验