第8章分离分析法导论.pptVIP

n越大，R越大——n=L/H，(R1/R2)2=n1/n2=L1/L2增加柱长的色谱柱可以提高分离度，但延长了分析时间。制备一根性能优良的柱子，通过降低板高，以提高分离度。（1）分离度与柱效的关系（3）分离度与相对保留值的关系r2,1=1时，R=0，不能使两组分分离。r2,11才可进行分离。r2,1大，选择性好。r2,1的微小变化，就能引起分离度的显著变化。改变固定相和流动相的性质、组成或降低柱温，可有效增大r2,1值。k增大可使R增大，当k10时，k/k＋1改变不大，R增长是不大，一般取k为1~10最宜。改变柱温和相比，可以改变k。（2）分离度与分配比的关系第29页，共41页，星期日，2025年，2月5日已知物质A和B在一根30.00cm长的柱上的保留时间分别为16.40min和17.63min。不被保留组分通过该柱的时间为1.30min。峰底宽度分别为1.11min和1.21min，计算：（1）柱的分离度；（2）柱的平均塔板数；（3）达到1.5分离度所需的柱长度。解：（1）柱的分离度R=2（17.63-16.40）/（1.11+1.21）=1.06（2）柱的平均塔板数n=16(16.40/1.11)2=3493n=16(17.63/1.21)2=3397n平均=（3493+3397）/2=3445（3）达到1.5分离度所需的柱长度R1/R2=(n1/n2)1/2n2=3445(1.5/1.06)2=6898L=nH=6898?(300/3445)=60cm第30页，共41页，星期日，2025年，2月5日三、色谱的定性分析和定量分析与标样对照的方法保留值法（单柱法和双柱法）相对保留值法已知物的峰高加入法1、色谱定性方法利用保留指数法定性方法：分别测出待测物质i与基准物质s的调整保留值，求出相对保留值ris，将ris与文献值比较后定性。基准物质通常选容易得到纯品的，且与被分析组分相近的物质，如正丁（戊）烷、环己烷（醇、酮）、苯、对二甲苯等。优点：ris仅随固定液及柱温变化，与其它操作条件无关。方法：首先作出未知物样品的色谱图，然后在未知物样品中加入某已知物，又得一色谱图，峰高增加的组分即可能为这种组分。优点：当未知样品中组分较多，所得色谱峰过密，用上述方法不易辨认时，或仅作未知样品指定项目分析时均可用此法。第31页，共41页，星期日，2025年，2月5日例：确定物质i在某固定液X上的保留指数IiX的数值。t?R(Z+1)内插法求IiX示意图信号t?R(Z)t?R(i)t进样保留指数定性法（柯瓦指数）方法步骤：（1）规定正构烷烃的保留指数为其碳原子数乘以100，如正戊烷，正己烷、正庚烷的保留值分别为500，600和700（2）z，z+1为正构烷烃的碳数，测得碳数为z，z+1以及样品i的调整保留时间分别为tR(z)’，tR(z+1)’，tR(i)’，且tR(z)’tR(i)’tR(z+1)’，求Ix’。（3）由求出的Ix’值查阅文献，推测未知物。优点：保留指数计算准确，准确度高，值仅与柱温和固定相有关第32页，共41页，星期日，2025年，2月5日仪器分析浙江万里学院生物与环境学院仪器分析浙江万里学院生物与环境学院第1页，共41页，星期日，2025年，2月5日一、色谱分析法及其基本概念1、色谱法的发展1906年，俄植物学家M.Tswett分离植物色素植物叶的色素组成叶绿素a（蓝绿色）叶绿素b（黄绿色）胡萝卜素（橙色）叶黄素（黄色）第2页，共41页，星期日，2025年，2月5日第3页，共41页，星期日，2025年，2月5日DevelopingofChromatographicTechnique1948,8daysseparationfor16aminoacids第4页，共41页，星期日，2025年，2月5日DevelopingofChromatographicTechnique1958,22hoursseparationfor19ofaminoacids第5页，共41页，星期日，2025年，2月5日DevelopingofChromatographicTechn