苹果汁中有机酸的分析混合维生素E的正相.pptVIP

3、液相色谱中的检测器分两类通用性检测器(也称为总体性)主要指总体特征优点:适用范围广；缺点:噪声浮动大，灵敏度低，不适于痕量分析，也不适于梯度洗脱。选择性检测器(也称为专用性)主要指某一特征优点:灵敏度高，噪声浮动小；缺点:适用范围窄。1.紫外吸收检测器2.紫外可见光检测器3.示差折光检测器4.光电二极管阵列检测器5.荧光检测器6.电化学检测器7.化学发光检测器8.蒸发光散射检测器常用的液相色谱检测器有二极管阵列检测器荧光检测器蒸发光散射检测器紫外双波长检测器6、色谱数据处理系统高效液相色谱的分析结果除可以用记录仪绘制谱图外，现已广泛使用微处理机和色谱数据处理工作站来记录和处理色谱分析的数据。色谱数据工作站的出现，不仅大大提高了色谱分析工作的速度，也为色谱分析工作者进行理论研发、开拓新型分析方法创造了条件，可以预料随电子计算机技术的迅速发展，色谱工作站的功能也会日益完善。实验目录实验一混合维生素E的正相HPLC分析条件的选择实验二维生素E胶丸中-VE的定量测定实验三果汁(苹果汁)中有机酸的分析混合维生素E的正相HPLC分析条件的选择1、实验目的(1)了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，掌握HPLC仪器的基本操作；(2)学会选择HPLC最佳分析条件的方法。2、实验原理维生素E(VE)主要有α、β、γ、和δ4种异构体，其中又以α-异构体的生理作用为最强。其天然品为右旋体(d-α)，合成品为消旋体(d1-α)，一般药用为合成品。药典中收载为维生素E是维生素E，d1-生育酚及其醋酸酯与琥珀酸钙盐、d1-α-生育酚及其醋酸酯与琥珀酸酯的混和物。也就是说，通常所说的VE是一个混合物，除了游离的生育酚羧酸酯可能同时存在外，也可能共存多种结构异构体，甚至还可能有其他有机物共存。VE的分离既可以用反相HPLC，也可以用正相HPLC。本实验采用正相HPLC。正相HPLC用的是极性填料分离柱(如硅胶柱)，流动相是弱极性或非极性溶剂(如正己烷)，样品因吸附作用在固定相中保留。在非极性溶剂中适当添加少量极性溶剂可以得到任意所需极性的流动相。色谱分析条件主要包括色谱柱、流动相组成与流速、色谱柱温度、检测波长等。通过实验主要了解流动相中添加极性溶剂对样品的保留和分离的影响，基本目标是要将α-VE与其他成分分离。3、仪器与试剂(1)仪器PE200型高效液相色谱仪或其他型号液相色谱仪(普通配置，带紫外检测器)；TC4色谱数据工作站；色谱柱：硅胶柱MicropakSi-5(4μm，4.6mm×150mm)；100／μL平头微量注射器；超声波清洗器；流动相过滤器；无油真空泵；50mL烧杯2个；50mL容量瓶3个；250mL容量瓶1个；500mL试剂瓶1只；5mL移液管2支；10mL，5mL，1mL移液管各一支。(2)试剂异丙醇、正己烷和无水乙醇纯度均为HPLC级；α-VE标准样品；混合维生素E；蒸馏水(本章所用蒸馏水均为二次蒸馏水，以下不另加说明)。4、实验内容与操作步骤(1)准备工作①流动相的预处理取HPLC级异丙醇200mL，正己烷1000mL，用0.45μm的有机滤膜过滤后，装入流动相贮液器内,用超声波清洗器脱气10～20min。注意!脱气时贮液器底部要用橡皮垫圈。②试样和标样的预处理取HPLC级无水乙醇500mL，用0.45μm的有机滤膜过滤后，置于试剂瓶中备用。取市售蒸馏水1瓶，用水相滤膜过滤后，置于原瓶中，备用。a.混合维生素E试样的配制称取混合维生素E试样200～300mg(准确至0.1mg)于一洁净的50mL烧杯中，用处理过的无水乙醇溶液溶解并定容至50mL容量瓶中，此为试样的储备液。移取5mL试样储备液于另一50mL容量瓶中，用处理过的无水乙醇定容，配制成试样溶液。b.α-VE标准溶液的配制称取VE标准样品250mg(准确到0.1mg)于一洁净的50mL烧杯中，用处理过的无水乙醇溶液溶解并定容至250mL的容量瓶中，此为标样贮备液。移取5mL标样贮备液于另一50mL容量瓶中，用处理过的无水乙醇溶液定容，配制成VE标准溶液。③高效液相色谱仪的开机a.按仪器说明书依次打开高压输液泵、紫外检测器、智能型接口的电源；b．打开色谱工作站，建立一个运行方法，运行时间设置为30min