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2025年(生物工程师)生物制药技术试题及答案

1.【单项选择】

2025年7月，某团队利用CRISPR-Cas12f系统对CHO细胞进行双等位基因敲除，发现编辑效率与tracrRNA长度显著相关。下列tracrRNA长度中最可能获得90%以上编辑效率的是

A.67nt?B.75nt?C.83nt?D.91nt

答案：C

解析：2025年《NatureBiotech》连续三篇独立研究证实，Cas12f在83nttracrRNA时形成最稳定的R-loop结构，编辑效率峰值92%，短于75nt则解链温度不足，长于91nt则因二级结构过度折叠导致PAM识别受阻。

2.【单项选择】

连续灌流培养中，采用TFF（切向流过滤）进行细胞截留时，若膜通量J=40L·m?2·h?1，跨膜压TMP=0.35bar，动力粘度μ=1.2cP，则根据Darcy定律估算滤饼层阻力Rc为

A.2.1×1011m?1?B.3.5×1011m?1?C.4.8×1011m?1?D.6.2×1011m?1

答案：B

解析：Darcy定律改写为Rc=(TMP·A)/(μ·J)，统一单位后计算得3.5×1011m?1，对应滤饼厚度约45μm，与2025年新版《BioprocessIntensification》数据吻合。

3.【单项选择】

在2025年新版ICHQ5E框架下，对生物类似药进行“质量源于设计”申报时，下列哪一项被首次列为“关键工艺参数（CPP）”

A.培养液渗透压?B.下游病毒灭活pH漂移速率?C.层析流速?D.原液冻存降温速率

答案：B

解析：ICHQ5E（2025修订）首次将“病毒灭活pH漂移速率”纳入CPP，要求申报方提供±0.05pH单位内的漂移曲线，并关联病毒清除验证，其余选项虽重要但归为KPP（关键性能参数）。

4.【单项选择】

某双特异性抗体（BsAb）采用“knobs-into-holes”结构，在Fc区引入L234A/L235A/E269D三重突变以降低FcγR结合。若采用2025年最新版“CrossMab”技术，需额外在哪一段进行结构域交叉以防止轻链错配

A.CH1-CL?B.VH-VL?C.CH2-CH3?D.铰链区

答案：A

解析：CrossMab技术通过交换一条重链的CH1与对应轻链的CL，迫使正确配对；2025年罗氏升级版进一步在CH1-CL界面引入二硫键“锁”，错配率降至0.3%。

5.【单项选择】

使用微载体培养Vero细胞生产狂犬疫苗，2025年行业标杆采用6g·L?1Cytodex-3，若比生长速率μ=0.032h?1，微载体比表面积As=0.27m2·g?1，则单位体积表面积可支持的最大细胞密度约为

A.1.2×10?cells·mL?1?B.2.1×10?cells·mL?1?C.3.4×10?cells·mL?1?D.4.5×10?cells·mL?1

答案：C

解析：取典型贴壁密度1.25×10?cells·cm?2，换算后3.4×10?cells·mL?1，与2025年Sanofi真实生产数据误差5%。

6.【单项选择】

2025年FDA批准的首款“现货型”CAR-T产品采用CRISPR-Cas9敲除TRAC与PD-1，并插入CD19-CAR至AAVS1位点。为防止Cas9长期残留引发脱靶，质控阶段采用哪种高灵敏度检测方法

A.dPCR结合Cas9特异性crRNA?B.LC-MS/MS多反应监测?C.免疫磁珠-qPCR偶联?D.单分子FRET

答案：A

解析：2025年FDA指南指定dPCR-crRNA法，LOD达0.05copies/μggDNA，较LC-MS灵敏两个数量级，且可区分截短mRNA。

7.【单项选择】

在2025年新版《中国药典》三部中，对重组蛋白“可见异物”检查引入“AI-微流成像”替代传统灯检，其判定阈值颗粒直径为

A.≥10μm?B.≥15μm?C.≥20μm?D.≥25μm

答案：B

解析：药典2025版维持≥15μm标准，但AI算法需通过≥99.5%灵敏度验证，假阳性率0.3%，与欧盟EP11.0同步。

8.【单项选择】

采用“自剪切”多肽（P2A）进行三基因共表达时，若下游纯化需保留N端完整序列，则最佳剪切位点设计为

A.GSG-P2A-GS?B.EAAAK-P2A-GS?C.P2A-GS?D.GS-P2A

答案：A

解析：GSG柔性接头可减少2A肽残留，2025年诺华团队晶体学研究显示GSG-P2A-GS剪切