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2025年临床基因扩增试题及答案

1.单选题（每题1分，共30分）

1.1在实时荧光PCR中，用于定量计算Ct值时，阈值线应设置在

A.基线期起始点

B.指数扩增期中段

C.平台期最高点

D.熔解曲线下降段

答案：B

1.2下列哪项不是TaqDNA聚合酶的典型特征

A.5′→3′聚合活性

B.3′→5′外切校正活性

C.热稳定性

D.末端转移酶活性

答案：B

1.3设计ARMS-PCR引物时，突变位点应置于

A.正向引物5′端第1位

B.正向引物3′端第1位

C.探针中部

D.反向引物5′端第10位

答案：B

1.4数字PCR中，阳性微滴比例0.12%，泊松校正后浓度约为

A.1.2copies/μL

B.12copies/μL

C.0.12copies/μL

D.120copies/μL

答案：A

1.5下列哪种内参基因在结直肠癌FFPE样本中最稳定

A.GAPDH

B.B2M

C.HPRT1

D.ACTB

答案：C

1.6逆转录反应使用随机六聚体引物的主要缺点是

A.无法扩增长片段

B.易形成引物二聚体

C.对RNA模板量要求极高

D.只能识别poly(A)尾

答案：B

1.7在qPCR效率计算中，斜率-3.32对应的扩增效率约为

A.90%

B.95%

C.99%

D.100%

答案：D

1.8下列哪项操作最能降低气溶胶污染

A.紫外照射15min

B.使用UNG酶体系

C.增加镁离子浓度

D.提高退火温度

答案：B

1.9多重PCR中，引物对间最易产生

A.移码突变

B.引物二聚体

C.无义突变

D.碱基缺失

答案：B

1.10高分辨率熔解曲线(HRM)区分SNP依赖于

A.扩增子GC含量差异

B.产物长度差异

C.荧光染料种类

D.引物浓度差异

答案：A

1.11下列哪项不是临床NGS建库必需步骤

A.末端修复

B.接头连接

C.桥式扩增

D.片段选择

答案：C

1.12在cfDNA提取中，提高小片段回收率应

A.增加蛋白酶K量

B.降低磁珠比例

C.提高洗脱体积

D.延长裂解时间

答案：B

1.13下列哪种荧光通道最适合FAM/VIC双通道检测

A.ROX

B.CY5

C.TEXASRED

D.HEX

答案：D

1.14当ΔCt(靶基因-内参)=5，扩增效率均为100%，拷贝数差异为

A.2倍

B.16倍

C.32倍

D.64倍

答案：C

1.15下列哪项不是qPCR质量控制的MIQE条目

A.引物序列公开

B.反应体系体积

C.数据分析软件版本

D.临床样本性别

答案：D

1.16在RT-qPCR中，去除gDNA污染首选

A.稀释模板

B.DNaseI处理

C.提高退火温度

D.延长变性时间

答案：B

1.17下列哪种突变最适合用TaqManMGB探针检测

A.15bp缺失

B.单碱基替换

C.三碱基插入

D.基因扩增

答案：B

1.18数字PCR中，微滴体积变异主要影响

A.特异性

B.灵敏度

C.精密度

D.线性范围

答案：C

1.19下列哪项最能提高PCR特异性

A.增加循环数

B.降落PCR

C.降低模板量

D.使用dUTP

答案：B

1.20在cfDNA肿瘤监测中，突变丰度0.05%对应

A.5ng/mL

B.50copies/mL

C.500copies/mL

D.0.5copies/mL

答案：B

1.21下列哪项不是PCR假阳性原因

A.引物二聚体扩增

B.实验室污染

C.探针降解

D.阴性对照污染

答案：C

1.22熔解曲线出现双峰最可能提示

A.引物特异性高

B.产物长度均一

C.非特异扩增

D.探针浓度过高

答案：C

1.23下列哪项操作可降低GC富集区扩增难度

A.增加dNTP浓度

B.添加甜菜碱

C.提高退火温度

D.减少引物量

答案：B

1.24在qPCR标准曲线中，R2=0.998表示