含量测定技术.pptVIP

二、仪器及其工作原理工作原理加热分析样品使其气化，由载气带入色谱柱，由于各组分在固定相与载气间分配系数不同，故在色谱柱中移动速度不同，经一段时间后彼此得到分离，再依次被载气带入检测器，将各组分的浓度或质量转换成电信号并记录成色谱图，根据色谱图的峰高或峰面积而进行定量分析。五、含量测定内标法常用于药物分析。外标法少用，因为GC进样量小，造成的误差较大。1.色谱条件和系统适应性试验（1）色谱条件主要包括载气、色谱柱、检测器、固定液（相）测试温度、进样量、载体等。其中检测器种类、固定液品种、以及色谱柱的材质不得改变，其它的如柱子的内径和长度、载体的种类和粒度、固定液涂布的浓度、载气的流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等可适当改变，以适应系统适用性试验的要求。①载气：一般为N2，还可用H2、He。②色谱柱：玻璃柱和不锈钢柱。③检测器:氢火焰离子检测器（氢焰检测器FID）适合有机物检测，灵敏度高，应用广泛。热导检测器（TCD）无机物、有机物均可检测，灵敏度较低，用于水分测定。电子捕获检测器（ECD） 适合含卤素、硫、氮等电负性强的元素的化合物测定。用于农残测定。④柱填料：吸附剂：硅胶、氧化铝等。较少用。高分子多孔小球：常用二乙烯苯乙基乙烯苯型的。气固吸附GC例如甲（乙）醇量、水分的测定。涂渍固定液的载体（多用）：常用经酸洗并硅烷化的硅藻土（红色载体、白色载体）属气液分配GC。⑤固定液：常用甲基聚硅氧烷（如SE-30、OV-17等）、聚乙二醇（如PEG-20等），一般涂布浓度为5～25％。（2）系统适应性试验（同HPLC）四、含量测定方法（外标法）TLCS含量测定有外标法和内标法，中国药典仅采用外标法。1.原理外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点，测得相应的吸光度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。2.类型根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点法和外标两点法。若标准曲线通过原点，采用外标一点法。若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。

外标一点法的直线方程：C=FAF为斜率

外标两点法的直线方程：

、F1为斜率F2为截距3.操作步骤（1）对照品溶液的制备（2）供试品溶液的制备（3）点样一般要求使用市售薄层板。①外标一点法：至少6个原点对照品（R）2个（同一质量）：2R供试品（S）4个（同一质量）分2组：2S12S2②外标两点法：至少8个原点对照品（R）4个分2组大质量的2个：2R1小质量的2个：2R2供试品（S）4个（同一质量）分2组：2S12S2对照品与供试品应交叉点加在同一块薄层板上，目的在于消除各种误差。测定时应保证供试品原点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量。外标两点法外标一点法（4）展开（5）显色定位供试品色谱中待测斑点的比移值（Rf值）和光谱扫描得到的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。（6）扫描应沿展开方向扫描，不得横向扫描。（7）含量计算①外标一点法▲求出供试品被测成分（斑点）的质量Ms=MRXAsARMs被测成分的质量（Mn=2）MR被测对照品的质量As被测成分吸收度（荧光强度）积分值（An=2）AR被测对照品吸收度（荧光强度）积分值（An=2）____▲求出供试品中被测成分的含量含量（W/W）=MsX稀释倍数取样量含量（W/片）=MsX稀释倍数X平均片重取样量②外标两点法▲求出供试品斑点中被测成分的质量Ms=?C+V1C