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2025年(生物工程)生物制药试题及答案

一、单项选择题（每题1分，共20分）

1.在CHO细胞中实现人源化单克隆抗体高表达时，最常用的启动子是

A.CMV即刻早期启动子

B.SV40早期启动子

C.EF1α启动子

D.U6启动子

答案：A

解析：CMV即刻早期启动子具有强转录活性，在CHO细胞中驱动外源基因表达效率最高，工业界90%以上高表达株采用该启动子。

2.2024年FDA批准的首款“酶替换+基因编辑”双功能疗法所采用的基因编辑系统是

A.ZFN

B.TALEN

C.CRISPR/Cas12a

D.CRISPR/Cas9-RNP

答案：C

解析：Cas12a（Cpf1）体积更小、PAM序列更宽松，适合AAV载体包装，且脱靶率低于Cas9，被用于体内编辑肝细胞PCSK9位点。

3.下列哪一项不是影响生物类似药“高度相似”评价的关键质量属性（CQA）

A.糖基化位点占有率

B.高阶结构指纹图谱

C.宿主细胞蛋白残留量

D.制剂中可见异物数量

答案：D

解析：可见异物属于GMP控制的一般项目，不属于表征分子本身结构/功能的CQA。

4.在单抗纯化ProteinA亲和层析中，降低抗体聚集体形成最有效的洗脱条件是

A.pH3.0，0.1M甘氨酸，室温

B.pH3.5，0.1M柠檬酸，4°C

C.pH2.8，0.2M精氨酸，室温

D.pH3.8，0.5M尿素，4°C

答案：B

解析：低温可减缓蛋白构象变化，pH3.5兼顾洗脱效率与抗体稳定性，柠檬酸缓冲体系对聚集体抑制最佳。

5.用于慢病毒载体生产的“第三代自灭活（SIN）”系统缺失的序列是

A.3′LTRU3区

B.5′LTRU5区

C.ψ包装信号

D.RRE元件

答案：A

解析：SIN设计删除3′LTRU3区，转录后病毒基因组两端均缺失U3，防止重组产生可复制病毒。

6.在微生物合成紫杉醇前体巴卡亭Ⅲ时，关键限速酶是

A.GGPPS

B.TS

C.DBAT

D.BAPT

答案：C

解析：DBAT（10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰转移酶）催化最后一步酰化，活性低导致巴卡亭Ⅲ积累不足。

7.2025年EMA发布的《基因/细胞治疗产品可追溯性指南》中，患者随访时限延长至

A.5年

B.10年

C.15年

D.30年

答案：C

解析：对于整合型载体或基因编辑产品，需监测延迟性插入突变，随访期统一延长至15年。

8.下列哪种层析模式最适合去除空壳AAV

A.阴离子交换（AEX）

B.阳离子交换（CEX）

C.疏水相互作用（HIC）

D.体积排阻（SEC）

答案：A

解析：空壳AAV基因组缺失导致表面电荷密度降低，AEX可在高盐条件下将空壳流穿，实壳结合。

9.在双特异性抗体构建中，防止轻链错配最常用且无需突变框架的策略是

A.CrossMab

B.KiH

C.DuoBody

D.SEEDbody

答案：A

解析：CrossMab将一侧Fab的CL与CH1互换，彻底消除错配，同时保持抗原结合活性。

10.用于高细胞密度灌流培养的“ATF-10”系统，其截留分子量（MWCO）为

A.10kDa

B.50kDa

C.100kDa

D.750kDa

答案：B

解析：ATF-10采用50kDa聚醚砜中空纤维，可截留抗体但让乳酸/氨等小分子代谢废物透过。

11.在mRNA疫苗生产中，用于去除双链RNA（dsRNA）的酶是

A.RNaseIII

B.RNaseT1

C.DNaseI

D.CIP

答案：A

解析：RNaseIII特异性切割dsRNA，降低TLR3/RIG-I免疫激活，提高翻译效率。

12.下列哪项不是连续生物制药下游的PAT实时检测指标

A.紫外280nm吸收

B.多角度光散射（MALS）

C.表面等离子共振（SPR）

D.电容率（Capacitance）

答案：C

解析：SPR用于结合动力学离线检测，无法在线实时输出。

13.在CRISPR高通量筛选中，确定基因必需性最常用的算法是

A.MAGeCK

B.DESeq2

C.edgeR

D.limma

答案：A

解析：MAGeCK针对CRISPRcount数据设计，可校正gRNA水平偏差，计算β-score。

14.用于稳定表达抗体Fc融合蛋白的G