试验室安全教育及荧光显微镜扫描型激光共聚焦介绍.PPTVIP

实验室安全教育

;安全培训的目标;;;不按照标准要求穿着工作服;在实验室里必须有一个严谨的态度;实验室安全涉及面;1.实验室用水安全;2.实验室用电安全;3.实验室气体安全;4.实验室用火安全;;;5.化学试剂的存放;;6.实验室病原微生物安全;7.仪器使用安全;特种设备：由取得特种设备资格证人员操作

确保水位在指定位置

升温升压时仔细观测仪器情况

使用时人不能离开;调整温度后待温度稳定方可离开

保证门关严实

东西不能放太多

塑料制品不要放在最下一层和不要贴近后壁;平衡

水渍擦干净

选择合适的离心管

使用时人不能离开;

生物安全柜内部能点酒精灯

超净工作台先开风机后点酒精灯;8.废物处理;;荧光显微镜

扫描型激光共聚焦显微镜

上转换激光共聚焦显微镜

;荧光显微镜;荧光显微镜;显微镜参数;7．荧光照明器：主机反射荧光系统可采用复眼照明技术，平均荧光视野亮度，便于量化分析；

8.荧光光源：130W以上长寿命荧光光源,光导管传输，长度1.5米，符合RoHS和WEEE法令要求；

9.高通透性荧光激发块：紫外，BP340-390,DM410，BA420-IF

蓝色，BP460-495,DM505，BA510-IF

绿色，BP530-550,DM570，BA575-IF；

10．荧光激发块转盘：编码型荧光激发块转盘，≥7孔位设计，便于今后扩展应用,无需工具即可更换滤色镜组,与软件连接后能够随图片保存荧光滤色镜组信息；

11．滤色镜：透射用日光平衡滤色片、绿色滤色片，荧光用减光片ND6/ND25；

12．DIC附件：40X、60X物镜配置微分干涉附件。;基本原理;标本制作要求;

荧光显微镜的不足:

1.无法实现对荧光,透射光的同时采集,无法实现多重荧光的同时采集及共定位。

2.荧光散射光太强，造成实际分辨率的大大下降。

3.荧光漂白及对细胞组织的照射损伤。

4.无法对样品进行断层扫描,完成3D的工作。

5.只能在二维环境下观察。

6.样品不能太厚。;激光共聚焦扫描显微镜;激光共聚焦扫描显微镜;上转换共聚焦扫描显微镜;仪器参数;仪器参数;仪器参数;仪器参数;基本原理;仪器特点;;;;3、点与面扫描技术

共聚焦显微镜：将样???分解成二维或三维空间上的无数点，用十分细小的激光束（点光源）逐点逐行扫瞄、成像，通过计算机软件组合，最后得到一个整体平面的或立体的像。

4、图像信号及处理：

光电倍增管放大信号，计算机采集和处理光信号。

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更灵敏：

共聚焦显微镜采用了光电倍增技术，可将很微弱的荧光信号放大。只要有信号就能被检测到。

定位更精确：

不仅可以定位到细胞水平，还可以定位到亚细胞水平、和分子水平。这也是荧光标记的抗体被称为分子探针的原因。

快速性：

由于利用光源光束点扫描，检测过程快，时间短，计算机精确控制激发光强度，光漂白和荧光淬灭作用很小。

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石蜡切片，冰冻切片，涂片，印片、铺片，培养的粘附细胞，悬浮细胞，各种染色，非染色荧光标记的组织（包括活组织）

;共聚焦显微镜的应用;1、高清晰成像;鼠成纤维细胞

单克隆anti–β-tubulin标记;涡虫纲扁虫肌动蛋白丝

鬼笔环肽;培养的人肝癌细胞吖叮橙染色;2、半定量荧光强度分析;利用荧光与透射光同时扫描，观测相等面积内不同组间荧光标记蛋白表达的差异。;4、分层扫描（切片扫描）;;连续分层扫描，可得到CT片类似的效果，对样品Z轴的结构进行分析。经计算机数据重组，可观测空间结构，空间定位，三维重组。;5、多色荧光标记检测;常用荧光探针介绍;细胞活性探针;细胞器探针;细胞骨架探针;核酸探针;谢谢！