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富血小板血浆操作规范

富血小板血浆（Platelet-RichPlasma，PRP）是通过离心技术从自体全血中分离出的血小板浓缩物，富含血小板衍生生长因子、转化生长因子等多种生物活性物质，在组织修复、再生医学领域应用广泛。其制备和应用需严格遵循标准化操作流程，以确保安全性、有效性及可重复性。以下从操作前准备、样本采集、离心分离、质量控制及临床应用等环节详细说明具体规范。

一、操作前准备

1.患者评估与知情同意

操作前需完成患者全身状况评估，重点排查以下禁忌证：严重凝血功能障碍（如血小板减少症、血友病）、败血症或局部感染灶、恶性肿瘤活动期、严重贫血（血红蛋白＜80g/L）、近期使用抗凝药物（如阿司匹林、华法林，需停药至少1周）及对自身血液成分过敏史。签署知情同意书时，需向患者明确PRP的自体源性特点、制备流程、可能的并发症（如局部肿胀、疼痛）及预期疗效的个体差异性。

2.环境与设备要求

操作应在符合《医疗机构临床实验室管理办法》的清洁区域进行，建议使用II级生物安全柜或超净工作台（环境温度22-25℃，相对湿度40-60%）。需配备的核心设备包括：

-低温离心机（具备温度控制功能，精度±1℃，最大转速≥3000g，需定期校准）；

-血小板计数仪（如全自动血细胞分析仪，校准周期≤6个月）；

-无菌采血系统（含真空采血管、采血针，建议使用封闭负压系统减少污染风险）；

-移液装置（量程1-10mL，需经压力蒸汽灭菌或使用一次性无菌枪头）；

-恒温保存箱（用于临时存放PRP，温度4-8℃，避免反复冻融）。

3.耗材与试剂选择

-抗凝剂：优先选用ACD-A（枸橼酸-枸橼酸钠-葡萄糖）溶液，比例为全血体积的1:9（如采集60mL全血需6mLACD-A），避免使用EDTA（可能导致血小板活化）或肝素（可能抑制生长因子释放）。

-采血管：需为无热原、无内毒素的无菌真空采血管，管壁需经硅化处理以减少血小板黏附。

-离心管：建议使用透明聚丙烯材质，容量与采血量匹配（如采集60mL全血需50mL×2离心管），避免使用玻璃材质（可能激活凝血级联反应）。

二、样本采集规范

1.采血操作

-患者取坐位或平卧位，选择肘正中静脉或贵要静脉（避免手背静脉，减少溶血风险），常规消毒（0.5%碘伏环形消毒3遍，范围≥8cm），待干后使用21G无菌采血针穿刺。

-首管弃血5mL（避免组织液污染），随后采集目标血量（一般治疗用量为10-20mLPRP，需采集全血40-60mL），采血过程需匀速（3-5mL/秒），避免负压过大导致红细胞破裂。

-采血后立即颠倒采血管8-10次（动作轻柔，避免剧烈震荡），确保抗凝剂与血液充分混合，标记患者信息（姓名、ID、采集时间）后30分钟内送检。

2.样本运输与暂存

血液样本需在采集后1小时内进行离心处理，若需延迟（≤2小时），应置于22-25℃环境中水平放置，避免冷藏（低温可能诱导血小板活化）或剧烈震动（可能导致溶血）。运输过程中使用防漏容器，外部套生物危害标识袋。

三、离心分离与PRP制备

1.双相离心法（推荐方案）

双相离心通过两次不同参数的离心实现血浆分层，可有效提高血小板回收率并减少红细胞污染。具体步骤如下：

-第一次离心（轻离心）：将全血转移至50mL离心管（每管≤45mL），平衡对称放置于离心机中，设置参数：转速1200-1500g，温度22℃，时间10分钟，加速度/减速度设为“低”（避免分层破坏）。离心后血液分为三层：底层为红细胞（约占50-60%），中层为白细胞和血小板（BuffyCoat，约占1-2%），上层为贫血小板血浆（PPP，约占38-48%）。

-分离中间层：使用移液管从上层PPP中吸取约2/3体积（保留1/3PPP与中间层混合），剩余液体（含BuffyCoat和部分红细胞）转移至新离心管。此步骤需避免吸取底层红细胞（若误吸，需重新离心）。

-第二次离心（重离心）：调整离心机参数为转速2000-2500g，温度22℃，时间8分钟，加速度/减速度设为“中”。离心后形成：底层为浓缩血小板（PRP，约占10-15%），上层为PPP。

-收集PRP：缓慢吸取上层PPP至剩余5-10mL（与PRP混合），最终PRP体积控制在原始全血体积的15-20%（如60mL全血制备8-12mLPRP）。

2.单相离心法（备选方案）

适用于设备限制或紧急情况，参数设置为转速3000g，时间15分钟，温度22℃。离心后直接吸取上层2/3血浆（含血小板），但该方法血小板浓度较低（约2-3倍基线值），且易混入红细胞（血红蛋白＞0.5g/L需废弃）。

四、