2025最新高三生物细胞工程：植物组织培养技术流程.docxVIP

2025最新高三生物细胞工程：植物组织培养技术流程

一、植物组织培养技术概述

植物组织培养是指在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。该技术利用了植物细胞的全能性，即具有某种生命全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能。

二、植物组织培养技术流程

（一）制备MS固体培养基

1.MS培养基的成分

大量元素：包括N、P、S、K、Ca、Mg等，是植物生长发育所必需的，参与植物体内各种重要化合物的合成，如蛋白质、核酸、磷脂等。

微量元素：如Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I等，虽然植物对它们的需求量极少，但在植物的代谢、生长和发育过程中起着不可或缺的作用，例如Fe是血红蛋白的组成成分，参与氧气的运输。

有机物：常用的有甘氨酸、维生素（如烟酸、肌醇、维生素B?、维生素B?等）、蔗糖等。蔗糖为植物细胞提供碳源和能源，同时也维持一定的渗透压；维生素参与植物的代谢调节。

植物激素：主要包括生长素和细胞分裂素。生长素（如IAA、NAA、2,4-D等）能促进细胞的伸长和生根；细胞分裂素（如6-BA、KT等）能促进细胞的分裂和分化，诱导芽的形成。两种激素的比例不同，会影响植物细胞的发育方向。

2.培养基的配制与灭菌

按照配方准确称取各种成分，将大量元素、微量元素、有机物等分别溶解后混合，调节培养基的pH值（一般为5.8左右，适合大多数植物细胞的生长）。

将配制好的培养基分装到培养皿或三角瓶中，然后用高压蒸汽灭菌锅在121℃、101kPa的条件下灭菌15-20分钟，以杀死培养基中的各种微生物，保证培养过程的无菌环境。

（二）外植体的选择与消毒

1.外植体的选择

外植体是指用于植物组织培养的离体的植物器官、组织或细胞。常见的有茎尖、根尖、叶片、花药、胚等。一般选择生长旺盛、分化程度低、再生能力强的组织或器官，如茎尖，其病毒含量极少，甚至无病毒，且细胞分裂能力强，容易诱导脱分化和再分化，是植物脱毒培养和快速繁殖的常用外植体。

2.外植体的消毒

外植体表面可能携带各种微生物，需要进行严格的消毒处理，以防止污染培养基和外植体。常用的消毒方法是先用体积分数为70%的酒精浸泡外植体30s左右，以杀死外植体表面的部分微生物，然后用无菌水冲洗2-3次，再用质量分数为0.1%的氯化汞溶液或质量分数为1%-2%的次氯酸钠溶液浸泡一定时间（如氯化汞溶液浸泡5-10min，次氯酸钠溶液浸泡10-15min），以进一步杀灭微生物，最后用无菌水冲洗3-5次，去除残留的消毒剂。

（三）接种

在无菌操作台上，用镊子和解剖刀将消毒后的外植体切成适当大小的小块，接种到制备好的MS固体培养基上。接种时要注意严格遵守无菌操作原则，避免外植体和培养基被杂菌污染。将外植体均匀地放置在培养基上，每个培养基上放置的外植体数量要适中，以保证有足够的生长空间和营养供应。

（四）培养

1.脱分化形成愈伤组织

将接种后的培养基放在适宜的光照、温度和湿度条件下培养。在植物激素（主要是生长素和细胞分裂素）的诱导下，外植体细胞逐渐失去其原有的分化状态，恢复分裂能力，形成一团排列疏松、无规则、高度液泡化的薄壁细胞，即愈伤组织。脱分化的培养条件一般是避光培养，温度控制在23-26℃左右，因为在这种环境下有利于细胞的分裂和脱分化。

2.再分化形成芽和根

当愈伤组织生长到一定程度后，改变培养基中植物激素的种类和比例，同时给予适当的光照（光照强度和时间根据植物种类而定，一般光照强度为1000-5000lx，光照时间为12-16h/d），诱导愈伤组织再分化形成芽和根。当细胞分裂素的比例相对较高时，有利于芽的分化；当生长素的比例相对较高时，有利于根的分化。通过调整激素比例，可以控制芽和根的分化顺序和数量。

3.炼苗与移栽

当试管苗长到一定高度，具有3-4片真叶时，将其从培养基中取出，进行炼苗。炼苗是将试管苗从无菌、恒温、高湿的培养环境中逐渐过渡到自然环境的过程。先将试管苗放在温室或大棚中，逐渐降低湿度、增加光照强度和时间，让试管苗适应外界环境。炼苗一段时间后，将试管苗移栽到经过消毒处理的基质（如蛭石、珍珠岩、泥炭土等）中，移栽后要注意保持适宜的湿度、温度和光照条件，及时浇水、施肥和防治病虫害，以提高试管苗的成活率。

三、植物组织培养技术的应用

1.快速繁殖：可以在短时间内大量繁殖植物，保持优良品种的遗传特性，适用于一些珍稀植物、经济作物和花卉的繁殖，如兰花、草莓等。

2.作物脱毒：利用茎尖等无毒组织进行培养，获得脱毒苗，提高作物的产量和品质，如马铃薯、甘蔗等作物的脱毒培养。

3.植物新品种的培育：通过植物组织培养技术结合基因工程、诱变