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人褪黑素(MT)试剂盒使用说明书

--谷研生物公司销售

本试剂盒研究使用。

检测范围：96T

0.8ng/L–32ng/L

使用目的：

本试剂盒用于测定人、血浆及相关液体样本中褪黑素(MT)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人褪黑素(MT)水平。用纯化的人褪黑素(MT)抗

体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微依次加入褪黑素(MT)，再与HRP标记

的褪黑素(MT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显

色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的。颜色的深浅

和样品中的褪黑素(MT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标

准曲线计算样品中人褪黑素(MT)浓度。

试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶8品（64ng/L）0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条9品稀释液1.5ml×1瓶

4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

标本要求

1.标本后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.品的稀释：本试剂盒原倍品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

32ng/L5号品150µl的原倍品加入150µl品稀释液

16ng/L4号品150µl的5号品加入150µl品稀释液

8ng/L3号品150µl的4号品加入150µl品稀释液

4ng/L2号品150µl的3号品加入150µl品稀释液

2ng/L1号品150µl的2号品加入150µl品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、孔、待

测样品孔。在酶标包被板上品准确加样50µl，待测样品先加样品稀释液40µl，

然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.

10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止

液后15分钟以内进行。

操作程序总结：