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亲和层析在蛋白质纯化中的应用研究

亲和层析(affinitychromatography,AC)是一种简单易操作的生物

大分子分离纯化的重要方法之一，它的基本原理是将与待分离纯化的

目标产物具有亲和力的亲和配体固定在载体上(比如说，常用载体有

琼脂糖、壳聚糖、纤维素、交联葡聚糖、聚丙烯酰胺、多孔玻璃等)，

利用目标产物与亲和配体之间的特异性亲和力，使得亲和配体选择性

地结合目标产物，从而达到分离纯化的目的。

亲和层析主要包括四个步骤：(1)制备亲和层析柱;(2)样品裂解液

与亲和层析柱结合;(3)将杂质洗出;(4)洗脱目标产物。亲和层析因具有

简单易操作、选择性高、载量大以及分离纯化的蛋白纯度较高等优点，

因而被广泛应用于在生物大分子的纯化，如结合蛋白、酶、抗体、抗

原、DNA、RNA、病毒、细胞等生物大分子的纯化。本文就亲和层析

在近几年蛋白质纯化中的应用作一介绍。

1亲和层析的类型

亲和层析的类型主要有：生物亲和层析(BAFC)、免疫亲和层析

(IAFC)、固定化金属离子亲和层析(IMAC)、拟生物亲和层析(BMAFC)以

及特殊基团亲和层析等。科研人员可以根据自己实验的实际需要选择

相应的亲和层析方法来达到实验目的。

2亲和层析在蛋白纯化中的应用

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蛋白的分离纯化是蛋白组学研究中一个非常重要的环节，蛋白质

能否有效的分离纯化关系到整个实验的成败。

2011年Arnold等用有机小分子1A4，2A8，2A9以及2A10作为

亲和配体，与N-羟基琥珀酰亚胺活化的琼脂糖凝胶4B(Sepharose4B)

共价结合制备成亲和层析柱，纯化了不同的抗体，其中以2A10作为

亲和配体所制得的亲和层析柱纯化得到的抗体产率大于90%，纯度大

于80%，这与以蛋白A为配体亲和纯化的抗体的产率和纯度相当，然

而小分子为配体的亲和层析柱却解决了以蛋白A为配体易污染、不稳

定的难题。

乙酰胆碱酯酶维持乙酰胆碱在动物体内平衡起着非常重要的功

能作用，对乙酰胆碱酯酶的研究有着极其深远的意义。2011年Askar

等以伴刀豆球蛋白和滕喜龙(一种抗胆碱酯酶药)作为配体，分别将它

们偶联到琼脂糖凝胶4B上和琼脂糖凝胶6B制成亲和层析柱，然后

从羊的肝脏中分离纯化了乙酰胆碱酯酶，纯化倍数达到842倍，且酶

的活性保持良好。

2011年Yari等应用对结核分枝杆菌A60抗原具有特异性免疫能

力的抗体作为亲和配体，将其偶联到经溴化氰活化的琼脂糖凝胶4B

上制备成亲和层析柱，成功地纯化了结核分枝杆菌A60抗原。

与其它亲和配体相比较，染料亲和配体有着价格低廉、稳定性好

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等优点。2013年Silva等以氨基方酸菁染料为亲和配体与交联琼脂糖

凝胶6B(SepharoseCL6B)偶联制成亲和层析柱，并用溶菌酶、ɑ-糜蛋

白酶以及胰蛋白酶三种酶的混合物对该亲和层析柱的分离纯化效果

进行了考察，结果表明，通过改变硫酸铵在洗脱液中的浓度，可以对

三种酶进行很好的分离纯化。

2013年Edupugant等将T-2毒素(T-Etoxin)共价结合到琼脂糖凝

胶上制成所需要的亲和层析柱，从蛋黄中分离纯化了免疫球蛋白(IgY)，

并用凝胶电泳对纯化了的IgY的纯度进行了表征。

2014年Baiel等以染料YellowHE-4R为亲和配体，将其偶联到琼

脂糖凝胶4B上制备成亲和层析柱，从牛乳清中纯化了乳铁蛋白，产

率为71%。同年，Baiel等同样以YellowHE-4R为亲和配体，将亲和基

质从琼脂糖凝胶4B换为壳聚糖微球(chitosanmini-spheres)制成亲和

层析柱，仅通过一步简单的亲和纯化就从牛乳清中纯化了乳铁蛋白，

产率从71%提高至77%，而且乳铁蛋白的纯度超过了90%。

3展望

随着蛋白组学研究的不断深入，亲和层析因具有简单易操作、载

量大、选择性高等优点，我们有理由相信亲和层析方法在未来的蛋白

的分离纯化中仍将扮演非常重要的角色。

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