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固相萃取-气相色谱-质谱联用法测定水产品中邻苯二甲酸酯的残留量

一、研究背景与目的

（一）研究背景

邻苯二甲酸酯（PAEs）作为典型的环境内分泌干扰物，常被用作塑料增塑剂广泛应用于食品包装、医疗器械等领域。水产品因生活环境与食物链富集特性，易受PAEs污染，其中邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）等物质已被欧盟列为优先控制污染物，我国GB5009.271-2016也明确规定食品中PAEs的限量标准。

水产品基质富含蛋白质、脂肪及水分，传统检测方法存在净化效率低、基质干扰强、检出限偏高的问题。固相萃取（SPE）技术因富集效率高、有机溶剂用量少的优势，已成为复杂基质前处理的核心手段；气相色谱-质谱联用（GC-MS）则凭借高分离度与特异性检测能力，是PAEs定性定量的首选技术。

（二）研究目的

建立固相萃取-气相色谱-质谱联用（SPE-GC-MS）检测水产品中16种PAEs残留的分析方法，明确前处理与仪器参数的最优条件；

验证方法的线性范围、检出限、回收率及精密度，满足痕量残留检测的准确性与可靠性要求；

应用该方法检测实际水产品样品，为食品安全风险评估提供技术支撑。

二、实验部分

（一）仪器与试剂

主要仪器：

气相色谱-质谱联用仪（GC-MS，配EI离子源），色谱柱选用50%苯基甲基聚硅氧烷固定相（30m×0.25mm×0.25μm）；

固相萃取装置（含真空控制系统），配备HLB固相萃取柱（60mg/3mL）；

超声波提取器（40kHz）、氮吹仪（控温精度±1℃）、高速冷冻离心机（15000r/min）；

分析天平（精度0.01mg）、Milli-Q超纯水机。

试剂与材料：

16种PAEs标准品（DMP、DEP、DIBP、DBP等，纯度≥99%），氘代内标D4-DEHP（纯度≥98%）；

甲醇、乙腈、正己烷、丙酮（均为色谱纯），无水硫酸钠（分析纯，550℃灼烧4h后备用）；

0.22μm有机相滤膜、玻璃器皿（经甲醇浸泡24h后烘干，避免塑料污染）。

（二）实验方法

标准溶液配制：

标准储备液：准确称取各PAEs标准品10mg，用正己烷溶解并定容至10mL，浓度为1000mg/L；D4-DEHP内标储备液浓度为500mg/L，于0-4℃冷藏保存，有效期2年；

混合标准工作液：取储备液用正己烷逐级稀释，配制浓度为1、5、10、50、100、500μg/L的系列工作液，加入内标使最终浓度为50μg/L。

样品前处理：

样品预处理：取鲜活水产品（如虾、鱼、贝类）去除外壳与内脏，匀浆后准确称取5.0g样品于50mL玻璃离心管中，加入10mL正己烷-丙酮混合溶剂（1:1，V/V）与50μL内标工作液，涡旋混匀2min；

超声提取：置于超声波提取器中，40℃超声萃取30min，4000r/min离心5min，收集上清液；残渣重复提取1次，合并两次上清液；

固相萃取净化：

活化：HLB柱依次用5mL甲醇、5mL超纯水活化，流速控制在1滴/秒，保持柱体湿润；

上样：将合并的提取液用超纯水稀释至50mL，以3mL/min流速过柱；

淋洗：用5mL5%甲醇水溶液淋洗，抽干30min去除杂质；

洗脱：用5mL乙腈分两次洗脱，收集洗脱液于玻璃管中；

浓缩定容：洗脱液中加入无水硫酸钠脱水，40℃氮吹浓缩至近干，1mL甲醇复溶，经0.22μm滤膜过滤后待检。

GC-MS检测条件：

色谱条件：载气为高纯氦气（纯度≥99.999%），流速1.0mL/min；柱温程序：初始温度60℃保持1min，以20℃/min升至220℃保持4min，再以5℃/min升至280℃保持1min，最后以20℃/min升至300℃保持10min；进样口温度280℃，分流进样（分流比10:1），进样量1μL。

质谱条件：离子源温度230℃，电子能量70eV；扫描模式为选择离子监测（SIM），定性离子保留时间偏差≤±0.5%，特征离子丰度比符合标准要求；定量采用内标法，以D4-DEHP为内标计算峰面积比。

三、结果与讨论

（一）前处理条件优化

提取溶剂选择：对比正己烷、乙腈、正己烷-丙酮（1:1）三种溶剂的提取效率，结果显示正己烷-丙酮混合溶剂对脂肪含量较高的水产品提取更彻底，16种PAEs平均回收率较单一溶剂高15%-20%，故确定为最优提取溶剂。

SPE柱与洗脱剂优化：分别试验HLB、C18、Florisil三种固相萃取柱，HLB柱对极性与非极性PAEs均有良好吸附性，洗脱后基质干扰峰最少；洗