高中生物选修专题一基因工程.pptVIP

④过程：a.DNA热变性（90～95OC)：b.复性或退火（55～60OC)：c.延伸（70～75OC)：d.重复a.b.c步骤：双链DNA模板在热的作用下，氢键断裂形成单键DNA系统温度降低，引物结合到互补DNA链上，形成局部的双链DNA在Taq酶作用下，合成与模板互补的DNA子链，形成双链DNA每重复一次，目的基因增加一倍PCR扩增为指数形式扩增2n(n为扩增循环的次数），在短时间内扩增大量目的基因。第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日(3)用化学方法直接人工合成目的基因蛋白质氨基酸序列→mRNA的核苷酸序列→目的基因序列→目的基因针对：基因比较小，核苷酸序列又已知推测化学合成推测第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日1.目的：二.基因表达载体的构建——核心IMN2.组成：①使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代。②同时使目的基因能表达和发挥作用。(3)终止子(4)标记基因(2)启动子(1)目的基因不同受体细胞，目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建有所差异。第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日质粒DNA分子限制酶处理一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种基因表达载体的构建*第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日三、将目的基因导入受体细胞1.转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的工程2.常见转化方法：①农杆菌转化法：双子叶植物和裸子植物。（1）将目的基因导入植物细胞③基因枪法：单子叶植物。②花粉管通道法（3）将目的基因导入微生物细胞—感受态细胞法。（2）将目的基因导入动物细胞——显微注射法。第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日①特点:农杆菌转化法：（1）将目的基因导入植物细胞能感染双子叶植物和祼子植物,对大多数单子叶植物没有感染能力②过程：Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上③适用生物：双子叶植物、祼子植物。第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日什么叫基因工程？基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。（一）基因工程的概念第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日（二）DNA重组技术的基本工具分子手术刀—限制性内切酶分子缝合针—DNA连接酶分子运输车—运载体第4页，共49页，星期日，2025年，2月5日识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。4000种。1、来源：2、种类：3、作用：4、结果：形成两种末端一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶粘性末端平末端第5页，共49页，星期日，2025年，2月5日什么叫黏性末端？被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。第6页，共49页，星期日，2025年，2月5日什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。第7页，共49页，星期日，2025年，2月5日限制性内切酶特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点切割。举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端，SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端。第8页，共49页，星期日，2025年，2月5日拓展（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端，在切开后的序列正着读和反着读碱基序列都一样称之为回文序列回文对：乾隆客上天