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2.1.3血液分析仪检测

血液分析仪（HA）是目前临床血液检验常用检测仪器。使用手工操作显微镜计数方法，由于操作过程的随机误差、实验器材的系统误差和检测方法的固有误差，使显微镜法细胞计数检验结果的精确性、准确性受到很大影响。尤其在检查大批量标本时，难于及时作出报告。20世纪40年代后期，美国人库尔特（W.H.Coulter）发明并申请了粒子计数技术设计专利；50年代初期，电子血细胞计数仪开始应用于临床。随着医学的发展，高科技的应用，特别是计算机技术的应用，血液分析仪的研制水平不断提高，检测原理不断完善，测量参数逐渐增多。检测速度快、精确度高、操作简便是血液分析仪的优势。各种型号血液分析仪的问世，不断为临床提供更有用的实验指标，对疾病的诊断与治疗有着重要的意义。目前，各类血液分析仪主要能完成两大功能，即细胞计数功能和细胞分类功能。血液分析仪检测原理主要是电阻抗法。

一、电阻抗法血液分析仪器的组成

电阻抗法仪器的主要组成部分包括：

信号发生器：通过小孔的各种血细胞都能产生电阻信号，信号电平的高低与细胞的大小成正比。

放大器：血细胞通过小孔时产生的脉冲信号非常微弱，需通过电子放大器，将微伏级信号放大为伏级脉冲信号，才可触发电路。

阈值调节：在计数不同细胞时，应调节阈值电平，以给出合适的阈值度，使计数结果尽量符合实际水平。

甄别器：各种微粒（血细胞、细胞碎片、杂质等）通过小孔时均可产生相应脉冲信号；甄别器则根据阈值提供的参考电平，将低于参考电平的各种非计数目标的假信号去掉，以提高计数的准确性。

整形器：经放大和甄别后的细胞脉冲信号，波形不一致，必须经过整形器调整为一致标准的平顶波形后，可触发计数电路。

计数系统：血细胞产生的脉冲信号，经过放大、甄别、整形后，送入计数系统；仪器对大小不同的脉冲进行选择，区分出不同类型的细胞并分别进行计数。

二、电阻抗法检测原理

根据血细胞相对非导电的性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行计数和体积测定，这便是电阻抗原理，又称库尔特原理。

将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置人不导电容器中，将小孔管（也称传感器）插进细胞悬液中。小孔管是电阻抗法细胞计数的重要组成部分，其内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。接通电源后，位于小孔管两侧的电极产生稳定的电流；混悬细胞的稀释液可从小孔管外侧通过小孔管壁上的宝石小孔（直径100nm，厚度约75nm）向小孔管内部流动。此时孔周围充满了具有导电性的液体，其电子脉冲是稳定的。如果提供的电流和电都是稳定的，根据欧姆定律，小孔的电压也是不变的（V=IR）。但当细胞通过小孔时，在电路中小孔感应区内电阻增高，于是瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。脉冲信号变化的程度取决于非导电性细胞体积的大小，细胞体积越大产生的脉冲振幅越高，测量脉冲的大小即可测出细胞体积大小，记录脉冲的数量就可测定细胞的数量。这些脉冲信号经过放大、阈值调节、甄别、整形、计数及自动控制保护系统，最终可打印出数据报告。电阻抗法细胞计数原理见图1。

白细胞计数和分类计数原理根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，依据这些脉冲的大小，可对白细胞进行分群。仪器可将体积为35~450fL的血细胞，分为256个通道，每个通道为64fL，根据细胞大小分别置于不同的通道中，从而显示出白细胞体积分布直方图。

经溶血素处理后脱水的血细胞体积大小，取决于脱水后细胞内有形物质的多少。淋巴细胞为单核细胞，颗粒又少，因此细胞小，一般为35~98fL；中性粒细

图1电阻抗法血细胞计数原理

胞核分叶多，颗粒多，胞体大，多为135~350fL；单核细胞、嗜酸性.粒细胞、嗜碱性粒细胞以及原始细胞、幼稚细胞等，多为98~135fL，称为中间型细胞。因此根据细胞体积大小，可初步确认相应的细胞群：第一群（35~90fL）是小细胞区，主要分布的是淋巴细胞；第二群（90~160fL）是单核细胞区，也称作中间细胞，主要包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜贼性粒细胞，核左移的各阶段幼稚细胞或白血病时白血病细胞；第三群（160fL以上）是大细胞区，主要是中性粒细胞。仪器根据各亚群占总体的比例，计算出白细胞各亚群的百分率；如果白细胞各亚群的百分率与同一标本的白细胞总数相乘，即得到各亚群细胞的绝对值。可见，电阻抗法血液分析仪白细胞分类只是根据细胞体积的大小，将白细胞分成几个群体。在一个群体中可能以某种细胞为主（如小细胞区主要是淋巴细胞），但由于细胞体积间的交叉，可能还存在其他细胞。

电阻抗法红细胞检测原理

红细胞计数和血细胞比容测定：目前，大多数血液分析仪都是用电阻抗法进行红细胞计