原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
叶绿素含量测定实验操作指南
一、技能要求
了解光合色素的一些重要理化性质，明确光合色素的提取及分离方法，学会
利用分光光度计测定叶绿素含量的方法。
二、实验原理
高等植物光合色素分为叶绿素（a和b）和类胡萝卜素（胡萝卜素和叶黄素）。
这两类色素均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用丙酮或酒精提取。由于这四种
色素在以滤纸为支持物的两相中（既流动相和固定相）的分配系数不同，所以它
们的移动速率也不同，因而可把它们从样品混合物中分离开。
叶绿素是一种二羧酸酯，能与碱起皂化作用，形成的盐溶于水中，因而可与
类胡萝卜素分开。叶绿素具有光化学活性，它吸收光能（光量子）后由基态转变
成激发态，处于激发态的叶绿素分子很不稳定，会迅速发射出长波（红光）而回
到原来的状态，产生暗红色的荧光。叶绿素易被光所破坏而退绿。叶绿素中的镁
可被H+所取代而生成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素。
铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，因此，用此法浸渍绿色标本可长期保持绿
色。
根据叶绿素对可见光的吸收光谱，利用分光光度计在某一特定波长下测定其
光密度，将色素分子的光密度对波长作图绘制成曲线，而后用公式计算叶绿素含
量。该方法不但精确度高，而且能够在未分离叶绿素a，b的情况下分别测定出
叶绿素a，b的含量。
根据Lambert-Beer定律，某有色溶液的吸光度A与其浓度C成正比，既：A
＝KbC。式中K为吸光系数，b为液层厚度。当C为溶质的质量分数，b为1cm
时，K为比吸光系数。
测定光合色素混合提取液中叶绿素a和叶绿素b的含量，只需要测定该提取
液在某一特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a，b在该波长下的比吸光系数
既可求出叶绿素含量。为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光应选择叶绿素在
红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a，b在红光区的吸收峰分别位于663nm和645nm，又知在波长
663nm下，叶绿素a，b的80%丙酮溶液的消光系数分别为82.04和9.27，在波
长645nm下分别为16.75和45.6，可据此列出下列关系式：
D663＝82.04Ca＋9.27Cb…………………⑴
D645＝16.75Ca＋45.6Cb…………………⑵
式（1）（2）中的D663，D645为叶绿素溶液在波长663nm，645nm时的光密
度，Ca、Cb分别为叶绿素a和b的含量（mg/l）。解方程得：
Ca＝12.7D－2.59D…………………⑶
663645
Cb＝22.9D645－4.67D663…………………⑷
将Ca与Cb相加即得叶绿素总量CT
CT＝Ca＋Cb＝20.3D645＋8.04D663……………...………⑸
所以只要测得叶绿素溶液在663nm和645nm处的光密度值，就可计算出叶
绿素a，b或总叶绿素的含量。
提取液总量
Ca××稀释倍数
1000
叶绿素a含量（mg/g）＝
样品鲜重（g）
提取液总量
Cb××稀释倍数
1000
叶绿素b含量（mg/g）＝
样品鲜重（g）
文档评论（0）