酶工程--固定化酶概述.pptVIP

B叠氮法⑶叠氮化。肼解后的CM-纤维素（1g）加入150ml2%HCl在冰浴中混合，搅拌滴加9ml3%NaNO2反应20min，过滤用冷蒸馏水洗涤，同时加酶(4)偶联：经叠氮化后的载体加入0.05NpH8.0磷酸缓冲液（内含250-500mg酶），5℃搅拌2-3小时，过滤，用0.001NHCl，水洗涤，即为固定化胰蛋白酶（冻干保存）B叠氮法对含有羧基的载体，与肼基作用生成含有酰肼基团的载体，再与亚硝酸活化，生成叠氮化合物。最后于酶偶联（三）交联法借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用，制成网状结构的固定化酶的方法称为交联法。也可用于含酶菌体或菌体碎片的固定化。（三）交联法常用试剂交联法一般步骤：固定化分两步进行第一步形成可溶性分子间交联络合物第二步是快速反应导致固化。戊二醛交联法OHC(CH2)3CHO戊二醛H2N-EN-HC=N-E-N=CH（CH2）3-CH=N-E-NCHCH（三）交联法常用试剂常用试剂：戊二醛、异氰酸酯、双重氮联苯胺等。应用最广泛的是戊二醛，它两个醛基都可以与酶或蛋白质的游离氨基形成席夫碱(shiff)甲苯-2-异氰-4-异硫氰（三）交联法的形式交联法有2种形式：