酶工程--酶的定向进化1.pptVIP

定向进化和理性设计通常意义上，定向进化使用随机突变和重组策略蛋白质的晶体结构和酶的催化机理研究为合理选择突变位点提供便利定向进化不需要知道酶的空间结构、活性位点、催化机理等正向突变概率低，突变库相对庞大，筛选工作量大，筛选成本高理性设计事先找出酶的关键氨基酸位点，有目的地改造正向突变概率高半理性设计半理性设计的突变策略饱和突变（saturationmutagenesis）在一个狭小的基因区域内产生所有或尽可能多的可能的突变饱和突变的方法盒式突变引物诱导的突变饱和突变的方法盒式突变（cassettemutagenesis）利用目标基因序列中适当限制酶切位点，插入各种合适的突变DNA片段，用以取代目标基因中特定DNA片段目标基因序列中有适当限制酶切位点饱和突变的方法引物诱导的突变（oligo-directedmutagenesis）点饱和突变QuikChange方法突变库的构建把随机突变获得的突变基因构建突变库，从中筛选获得阳性突变突变库要求：容量足够大包含的DNA序列足够完整突变库构建的流程：基因重组：将突变的酶基因连接到合适的载体转化或转染：将含有酶基因的载体转化或转染到合适的宿主突变库的构建选择合适的载体质粒、噬菌体载体、柯斯质粒等选择合适的表达宿主大肠杆菌、酵母、枯草芽孢杆菌、真菌、噬菌体等