土壤微生物生物量.docVIP

氯仿熏蒸提取法测定土壤微生物生物量

1.仪器

真空干燥器、可调加液器、玻璃离心管、塑料离心管、烧杯

2.试剂

无乙醇氯仿：市售氯仿通常含有乙醇，将氯仿试剂按1：2（V:V）的比例与去离子水放入分液漏斗，充分摇动1分钟，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，反复洗涤3次，得到的无醇氯仿加入无水氯化钙，除去氯仿中的水。纯化后的氯仿用棕色试剂瓶4摄氏度黑暗保藏。

硫酸钾溶液（0.5mol/L）：43.57克K2SO4溶于1L水

氢氧化钠（10mol/L）

3.操作步骤

土壤前处理

新鲜土壤应立即进行前处理后保存与4摄氏度的冰箱中。土壤通过（2mm）筛处理，混匀。如土壤过湿，应在室内适当风干，风干过程中应经常翻动，防止局部干燥。用去离子水调节土壤湿度到土壤持水量的40%，此时土壤手感湿润疏松但不结块。

土壤熏蒸

称取相当于10g烘干土壤的湿土与25ml比、玻璃瓶中，放入干燥器中，干燥器底部放置几张湿润的滤纸，同时放置一个装有50ml1mol/LNaOH溶液和一个装有50ml无醇氯仿的烧杯（内加少量抗暴沸的物质），用少量凡士林封闭干燥器，用真空泵抽气（-0.07MPa）至氯仿沸腾并保持3-5分钟。关闭干燥器阀门，在25℃黑暗处放置24小时。打开阀门，听到空气进入声音，否则重做（干燥器漏气）。取出氢氧化钠与氯仿烧杯，氯仿倒入瓶中可继续使用。擦净干燥器底部，拿走滤纸，

提取C

转移熏蒸土壤至离心管中，加