重组质粒连接转化及筛选技术要点与策略.pdfVIP

重组质粒的连接、转化及筛选

概述

质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的片段(＜10kb)且结构简

单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限

制性内切酶切割质粒和目的片段,然后体外使两者相连接,再用所得到重组质粒

转化细菌,即可完成。但在实际工作中,如何区分有外源的重组质粒和无而自

身环化的载体分子是较为的。通过调整连接反应中外源片段和载体的浓度

比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,

如载体去磷酸化等来最度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学如α互补现象

等来鉴别重组子和非重组子。

外源片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种：

1、带有非互补突出端的片