流式细胞仪原理及应用.ppt

基本原理 光源 488nm兰绿色，15mW空冷，氩离子激光 流路 流动室(flow cell) 鞘液SHEATH：(ISOTON II, III) PBS 无颗粒，无荧光本底 无菌，稳定的pH 样本流SAMPLE 单细胞悬液5*105~1*106个/ml 放大部分 光电倍增管PMT HV 放大电路 GAIN 增益 线性：LIN 对数：LOG 统计：计算机 FLOW CELL FLOW CYTOMETRY(FCM) 滤片 带通滤片 BAND PASS (BP) 只允许某些波长的光通过 二向色性滤片 DICHROIC FILTER 一定波长以上通过，该波长以下折射 OPTICS 信号 荧光信号 FL1，FL2，FL3，FL4 线性，对数 散射光信号 前向散射光(FS)：细胞大小 侧向散射光(SS)：结构复杂程度 荧光染料的特性 常用荧光染料的特性 细胞的特征与细胞功能 不同细胞的形态学特征 不同细胞的蛋白表达 其它细胞功能特征 CD分子(Cluster of differentiation) -------人类白细胞分化抗原1982年巴黎首届国际学术会议确定CD命名法已有200多个分化抗原群被鉴定和命名已得到WHO有关管理机关批准 CD抗原及其相关细胞群 细胞群 CD抗原 T细胞 CD2 CD3 CD4 CD5 CD7 CD8 CD28 CD38 B细胞 CD10 CD19 CD20-CD24 CD37 CD72-CD75 髓系细胞 CD13 CD14 CD15-CD17 CD33 CD34 CD35 NK细胞 CD16 CD56 CD57 CD94 血小板 CD31 CD41 CD42a CD42b CD61 CD62p CD63 激活抗原 CD26 CD30 CD69 CD95-CD97 粘附分子 CD11a-c CD18 CD29 CD44 CD49a-f 内皮细胞 CD105 CD106 CD109 细胞因子受体 CD25 CD115 CD117 CD122 CD126 5例正常人CD4,CD8计数 编 WBC LY/WBC LY CD4/LY CD4 CD8/LY CD8 CD4/CD8 号 *109/L *100% *109/L *100% *109/L *100% *109/L 1 8.1 33.1 2681 38.3 1027 25.4 680 1.51 2 6.7 35.0 2345 43.2 1014 26.0 609 1.66 3 8.0 36.5 2920 38.0 1110 27.0 788 1.41 4 5.4 36.0 1944 43.5 846 22.0 428 1.98 5 5.4 34.1 1841 46.5 856 25.5 469 1.82 8例HIV/AIDS患者CD4,CD8计数 编 WBC LY/WBC LY CD4/LY CD4 CD8/LY CD8 CD4/CD8 号 *109/L *100% *109/L *100% *109/L *100% *109/L 1 3.9 44.5 1736 34.9 606 48.0 833 0.73 2 1.8 32.0 576 4.3