4、消毒剂效力验证.ppt

* 37 消毒剂效力验证主讲：柴海毅 能消除以细胞繁殖形态出现的微生 物污染的化学物质。 消毒剂的定义： 抗菌剂（Antiseptic) 化学杀菌剂 (Chemical Disinfectant) 清洁剂 (Cleaning Agent) 消毒剂 (Disinfectant) 卫生洗涤剂 (Sanitizing Agent) 杀孢子剂 (Sporicidal Agent) 灭菌剂 (Sterilant Agent) 消毒剂的分类定义（USP29 <1072>） 能消除以细胞繁殖形态出现的微生 物污染的化学物质。 消毒剂的定义： 消毒剂可以杀死孢子 化学消毒剂的消毒效果取决于其浓度 消毒剂是“无菌”的 把消毒剂泼洒在表面是一个有效的消毒方式 消毒剂的实验室评估是不可靠的 对消毒剂的部分误解： 理想的消毒剂： - 抗菌谱广 - 低毒或无毒 - 无腐蚀性，无污染 - 有洗涤作用 - 稳定性好 - 作用迅速 - 作用持久 - 价格低廉 影响消毒剂评估的因素： - 菌种 - 接种 - 培养基组分 - 培养时间/温度 - 接触时间 - pH值 - 中和剂的种类 - 渗透压 - 表面张力 - 回收率 - 样品量 - 培养基性质 - 测试/验证方法 消毒剂验证的目的： 通过特定的微生物与某消毒剂在规定的使用浓度下，接触规定的时间后，对微生物进行培养、计数，考察消毒剂的消毒/杀菌效果。 消毒剂验证步骤： 第一步：在实验室对代表细菌在规定的使用浓度和 规定的作用时间进行确认。 第二步：用于洁净区域不同材质的载体，进行模拟 试验，作环境验证。 第三步：完成验证报告，形成SOP。 验证用菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿色假单胞菌、枯草杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。 菌种选择的原则:代表性,普遍性,易存活、低或非致病性,标准菌种。(环境中常见的污染菌)。 菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。 验证菌种： 挑战微生物(USP 29) AOAC挑战菌 典型环境分离菌 杀菌剂：大肠埃希菌ATCC 11229 金黄色葡萄球菌ATCC 6538 铜绿假单胞菌ATCC 15442 杀菌剂：藤黄微球菌，表皮葡萄球菌，杰氏棒杆菌 ，泡囊假单胞菌 杀真菌剂：白色念珠菌ATCC 10231或2091 产黄青霉ATCC 11709 黑曲霉菌 ATCC 16404 杀真菌剂：产黄青霉，黑曲霉菌 杀孢子剂：枯草芽孢杆菌ATCC 19659 杀孢子剂：球形芽孢杆菌 ，苏云金芽孢杆菌 消毒剂验证的准备试验 合格中和剂的选择筛选 常见干扰物的中和剂或灭活方法 2010年版中国药典 附录109页 干扰物 可选用的中和剂或灭活方法 戊二醛 亚硫酸氢纳 酚类、乙醇、吸附物 稀释剂 醛类 稀释剂、甘氨酸、硫代硫酸盐 季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯、 卵磷脂、聚山梨醇酯 汞类制剂 亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐 双胍类化合物 卵磷脂 碘酒、洗必泰类 聚山梨醇酯 卤化物 硫代硫酸盐 乙二胺四乙酸（EDTA） 镁或钙离子 磺胺类 对氨基苯甲酸 ?-内酰胺类抗生素 ?-内酰胺酶 中和剂毒性试验： 将10～100 CFU的微生物加入到中和剂中 薄膜过滤，冲洗，培养，计数 与菌液对照组比较，回收率应＞70％ 中和剂效力试验 将消毒剂和中和剂混合（记录时间） 加入10～100 CFU微生物 薄膜过滤，冲洗，培养，计数 与菌液对照组比较，回收率应＞70％ 验证方法 - 薄膜过滤法 ● 菌悬液和消毒剂直接混合，在不同的时间间隔条件下过滤，培养后评价。 验证准备： - 测试菌液准备 用于验证的菌悬液稀释至106～108 CFU/ml左右 - 消毒剂稀释至规定浓度。 分装10ml于若干无菌试管中； 试管上标注消毒时间：“1分钟组” ，“5分钟组” ， “10分钟组”或其他要求的时间段。 - 稀释剂：无菌纯水 验证步骤（1）： - 接种 接种各验证菌种至盛有待验证消毒剂的试管（使接后浓度＞104 CFU/ml)，混合均匀，并立即开始计时。 - 中和、过滤将消毒剂倾入100ml中和剂中，混合，稀释（如需要），过滤，然后用100ml中和剂清洗滤膜，过滤3次。 - 阳性对照 用无菌水代替消毒剂，步骤同上。 验证步骤（2）： -培