广谱高效微生物防腐剂产生菌的筛选及应用硕士研究生毕业专业论文.docxVIP

硕 士 学 位 论 文 广谱高效微生物防腐剂 产生菌的筛选及应用 学科门类 理 学 学科专业 微生物学 培养单位 生物工程学院  Screening of Broad-spectrum Biocontrol Substance Producing Strain and Application A Dissertation Submitted for the Degree of Master Candidate： Supervisor：Prof. Associate Prof. College of Bioengineering Henan University of Technology, Zhengzhou, China  关于学位论文的独创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在指导教师指导下独立进行研究工作所取得的成果，论文中有关资料和数据是实事求是的。尽我所知，除文中已经加以标注和致谢外，本论文不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得河南工业大学或其它教育机构的学位或学历证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对研究所做的任何贡献均已在论文中做出了明确的说明。??? 若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 学位论文作者签名： ?????? 日期： 年 月 日 学位论文使用授权书 本人完全同意河南工业大学有权使用本学位论文（包括但不限于其印刷版和电子版），使用方式包括但不限于：保留学位论文，按规定向国家有关部门（机构）送交学位论文，以学术交流为目的赠送和交换学位论文，允许学位论文被查阅、借阅和复印，将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，采用影印、缩印或其他复制手段保存学位论文。 保密学位论文在解密后的使用授权同上。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 指导教师签名： 日期： 年 月 日   摘 要 微生物导致食品的腐败变质不仅会造成巨大经济损失，还会引起严重的食品安全问题。而现有的食品防腐保鲜方法在实际生产应用中具有一定的局限性，迫切需要寻求更安全有效的防腐保鲜新技术，将微生物及其代谢产物应用于食品防腐保鲜的生物防治方法是现阶段研究的热点。 从轮马热泉、北海温泉、大塘热泉等腾冲温泉附近采集土壤样品23种，采用稀释分离法分离纯化得到细菌菌株142株。以大肠杆菌、黑曲霉、禾谷镰刀菌等为指示菌，采用滤纸片法或平板对峙法从142株细菌菌株中初步筛选得到具有广谱抑菌效果的菌株7株，其中菌株 LM2303广谱抑菌效果最好。通过形态特征分析、生理生化特性分析和16S rDNA序列比对，菌株LM2303应为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 采用紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变和微波诱变对菌株LM2303进行选育。其中，经硫酸二乙酯诱变处理得到突变菌株D59，其抑菌效果较原始菌株提高了11.4%。以抑菌物质产量为指标，从8种基础培养基中筛选出菌株D59最佳发酵培养基M2。采用单因素实验和响应面分析对菌株D59进行发酵条件优化。单因素试验结果表明培养时间、温度和转速对菌株D59抑菌物质产量有显著影响(p<0.05)。利用响应面确定菌株D59的最佳培养条件为：接种量5%、装液量100mL/250mL、培养时间43h、温度33℃、转速177rpm。在上述发酵条件下培养，100mL发酵液可得到抑菌物质粗提物2.8560 g(湿重)，是原发酵条件下的1.4倍，有效提高了抑菌物质产量。 采用盐酸沉淀、甲醇萃取，从拮抗菌株发酵液中得到抑菌物质粗提物。利用薄层色谱对抑菌物质进行分析和初步纯化，紫外及茚三酮显色结果表明抑菌物质含有苯环和闭合肽键。红外光谱扫描结果表明菌株LM2303抑菌物质为环状脂肽类物质。该脂肽类物质理化性质稳定，抑菌谱广，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌和黑曲霉、黄曲霉、扩展青霉、禾谷镰刀菌等真菌均有较强的抑制作用。 从不同腐烂病症的冬枣上分离得到根菌索菌、细极链格孢、橄榄色盾壳霉、扩展青霉四种致腐真菌。平板对峙试验结果表明菌株LM2303可有效抑制上述四种真菌的生长，菌株LM2303具有冬枣贮藏期致腐真菌的生物防控应用潜力。 ………………… 关键词：枯草芽孢杆菌；拮抗；抑菌物质；诱变选育；发酵条件优化   ABSTRACT Food spoilage caused by pathogenic microorg