Chapter1Instruction探索.ppt

●20世纪60年代末至70年代初，限制性核酸内切酶和连接酶等陆续被发现,有了进行DNA操作基本工具,使DNA进行体外切割和连接成为可能。 ●1972年美国斯坦福大学Berg博士领导的研究组用EcoRI在体外对猿猴病毒SV40的DNA和λ噬菌体DNA分别酶切,然后用T4 DNA连接酶将两种酶切片段连接，结果获得了SV40和λ噬菌体DNA的重组DNA分子，成功完成了世界上第一次DNA体外重组实验，并因此与Gilbert、Sanger分享1980年度诺贝尔化学奖。 1972 - Paul Berg : Produced first recombinant DNA using EcoRI EcoRI recognition sites λ phage DNA EcoRI cuts DNA into fragments Sticky end SV40 DNA The two fragments stick together by base pairing DNA ligase Recombinant DNA ②基因工程问世 1973年，Cohen等人将编码Kan抗性基因质粒R6-5和编码Tet抗性基因质粒pSC101混合后，加入EcoRI进行酶切，用T4 DNA连接酶连接成重组DNA分子，最后转化大肠杆菌，结果某些转化菌落表现出既抗Kan又抗Tet的双重抗性特性。从这种双抗性转化菌落的大肠杆菌中分离出的重组质粒DNA带有完整pSC101分子和一个来自R6-5质粒编码Kan抗性基因DNA片段。 1973 - Boyer, Cohen Chang:Transform E. coli with recombinant plasmid Stanley Cohen Annie Chan Herbert Boyer Kanamycin resistance gene Plasmid pSC101 Tetracycline resistance gene E. coli transformed with recombinant plasmid Transformed cells plated onto medium with kanamycin and tetracycline Only cells with recombinant plasmid survive to produce colonies ③基因工程的迅速发展阶段 自基因工程技术问世以来，这三十多年是基因工程迅速发展的阶段。不仅发展了一系列新的基因工程操作技术,而且构建了多种供转化原核生物和动物、植物细胞载体,获得大量转基因菌株。 1981年首次通过显微注射培育出世界上第一个转基因动物―转基因小鼠。 1982年基因工程胰岛素商品在美国投放市场。同年采用农杆菌介导法培育出世界上第一例转基因植物―转基因烟草。 1985年基因工程微生物杀虫剂通过美国环保署审批,1990年基因治疗开始进入临床试验。 如果说20世纪八九十年代是基因工程基础研究趋向成熟，应用研究初露锋芒的阶段，那么21世纪将是基因工程应用研究的鼎盛时期，农、林、牧、渔、医等的很多产品都会打上基因工程的标记。 基因工程的应用 基因工程技术已经在医学、工业、农业等各个领域得到了广泛的应用。 Medicine and Pharmaceuticals Research Industry and Environmental treatment Plant and Agriculture Forensic application Applications Medicine Pharmaceutical protein Vaccination Animal models of human diseases Organ transplantation Gene therapy Applications 胰岛素 1000 磅牛胰 10 克胰岛素 200 升发酵液 10 克胰岛素 干扰素 1200 升人血 1 升发酵液 2－3 万美元 / 病人 200－300 美元 / 病人 Human Growth Hormone (HGH) produced by gene transfer Gene therapy for recessive diseases—absence of the enzyme adenosine deaminase (ADA) 腺苷脱氨酶缺乏症Aadenosine deaminase def