20S人参皂苷Rh2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响.doc

20_S_人参皂苷Rh_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响 李秋影 炎璐璐 马晓慧 张莉华 张兰兰 郭治昕 天津中医药大学，天津300193；2. 天津天士力研究院药理毒理所，天津3004410） 摘要： 目的 研究20（S）-人参皂苷Rh2对人结肠癌Cacao--2和HT-29细胞增殖及周期的影响。 方法 采用荧光微孔法测定20（s）--人参皂苷Rh2对人结肠癌Cacao-2、HT-29细胞增殖的影响：利用显微镜观察给药后HT-29细胞形态变化：流式细胞术分析20（s）-人参皂苷Rh2对HT-29细胞周期分布的影响。 结果 20（S）-人参皂苷Rh2对Caco-2、HT-29细胞生长有抑制作用，并呈剂量依赖性：20（S）-人参皂苷Rh2作用48h后，对HT-29、Caco-2细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为19.68、26.79μg/ml；流式细胞分析结果现实，与对照组细胞相比，20（S）-人参皂苷Rh2能显著减少HT-29细胞的G0/G1期和G2/M期细胞比例，增加D期细胞比例。 结论 20（S）-人参皂苷Rh2可抑制人结肠癌细胞增殖，主要原因是阻滞细胞处于S期 关键词： 20（S）-人参皂苷Rh2：HT-29：Caco-2：细胞增殖：细胞周期 中图分类号：R996 文献标识码：A 文章编号：1001-1528（2001）11-1874-05 人身为五加科人参属植物人参Panax ginseng C.A.meyer的干燥根，是已有几千年应用历史的名贵中药。现代医学研究表明，人参中包含有机酸、维生素、糖类、无机盐、固醇、寡肽、多糖、挥发油类和人参皂苷等多种成分，具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性。人参皂苷Rh2作为人参中一类主要生物活性成分，在癌症的治疗方面具有较强的活性，其中一人参皂苷-Rg3为主要成分的抗癌新药参一胶囊已作为中药一类新药上市。大量研究表明，人参皂苷Rh2也同样具有较好的抗癌活性，如通过抑制端粒酶活性从而诱导肝癌SMMC-7721细胞分化、通过介导细胞内Caspase一类半肽氨酸蛋白酶进行信号传导进而诱导人黑色素肿瘤细胞A375-S2细胞的增殖并诱导凋亡以及逆转耐药的白血病细胞等。药代动力学研究表明，人参皂苷-Rh2主要在肝、胃肠道分布；并通过线粒体途径包括P53、CASP5等多靶点诱导结肠癌SW480细胞凋亡，国内也有文献初步报道人参皂苷Rh2可抑制人结肠癌细胞株SW620和LOVO生长。从结构上，人参皂苷Rh2可分为S型和R型的构象，其中20（S???-人参皂苷Rh2单体（20（S）-G-Rh2）是植物中分离的主要构型。但20（S）-G-Rh2单体对人结肠癌细胞Ht-29和Caco-2的影响目前还未见报道。本研究旨在观察20（S）-G-Rh2对人结肠癌Caco-2和Ht-29细胞增殖及对周期的影响，以期为新药研发和临床治疗结肠癌提供理论依据。 1 材料和仪器 20（s）-G-Rh2（天津天士力药物研究院现代中药研究所，纯度为90%）：DMEM培养基（GIBCO-BRL公司）；胎牛血清（G1BCO-BRL公司）；二乙酸荧光素Flourescein Diacetate,FDA（Sigma）；Cell Cy-cle Phase Determination Kit（Cayman Chemical Com-pany）；流失细胞仪FACSCcalibur（Bechman Dickson公司）；Caco-2、HT-29细胞由西河医科大学基础医学细胞中心引进，由本实验室传代培养； 2 方法 2.1 细胞培养于传代 将HT-29和Caco-2细胞至于37℃，饱和湿度5%CO2培养箱中常规培养，均用含10%热灭活胎牛血清，1%的抗生素（青霉素100mg/L和链霉素100mg/;）的DMEM完全培养基。细胞呈单层生长，达80%左右融合时，采用0.25%的胰酶和0.02%EDTA（1：1）混合消化液（胰酶）消化传代，取生长对数期的细胞用于实验。 2.2 荧光微孔法监测细胞增殖实验 将对数生长期的HT-29、Caco-2细胞，用胰酶消化，用DMEM完全培养基配成单个细胞悬液，调整细胞浓度为5×104个/mL。接种于96孔培养板中，每孔接种100μL，于37℃，饱和湿度5%CO2培养箱中培养24h后换液，空白对照组为DMEM培养基，实验组每孔加入50-12.5μg/mL5个浓度的20（2）-G-Rh2（用DMEM培养基配置）处理48h，每个浓度组及对照组君左3个平行孔。48h后吸弃板中培养基，加入100μL含2.5μg/mL二乙酸荧光素的PBS重复洗2变，甩去PBS并吸弃板中剩余的PBS，Leica DM16000B 电动倒置荧光相对显微镜在激发和发射波长分别为488nm和530nm下，测定每孔的荧