富血小板血浆对大鼠跟腱断裂早期愈合影响.pdf

富血小板血浆对大鼠跟腱断裂早期愈合的 影响 硕士研究生：熊小龙 指导教师：余斌 摘要 研究背景 随着全民健身运动的广泛开展及国家竞技水平的提升，闭合性跟腱断裂的 发病率逐渐增加。在临床上，治疗闭合性跟腱断裂有手术与非手术治疗，手术 治疗术后相关并发症多且成本高，但非手术治疗会引起跟腱的二次断裂。因此， 在非手术治疗闭合性跟腱断裂时，研究促进跟腱愈合并能降低跟腱再断裂率的 非手术治疗方法具有重要的临床意义。 ‘ 富血小板血浆(platelet-richplasma，PRP)是全血经离心后提取的含高浓度 等。PRP可以从从患者的自体外周血中提取，并通过离心而获取高浓缩的血小 板。由于其血小板含量较正常全血高数倍且富含各类细胞因子，PRP作为一种 非手术治疗闭合性跟腱断裂在临床上已成为研究热点。 在PRP在骨科损伤中应用以来，大部分文献报道PRP中的血小板及各类生 长因子以及它们之间的相互作用，在各类细胞因子综合作用下表现出良好的促 进组织损伤的修复作用。但也有文献报道PRP并没有明显的促进损伤组织的愈 合作用。因此，PRP在骨科损伤中的应用效果还存在争议。我们以大鼠为实验 对象，制备跟腱断裂模型，通过局部应用PRP后观察大鼠新生跟腱的胶原纤维 生成及组织学、生物力学变化，探索局部应用PRP对闭合性断裂跟腱愈合的影 响，以及可能的有效愈合时间，为临床应用提供理论依据。 摘要 目的 通过大鼠断裂跟腱周围注射PRP，观察PRP对大鼠跟腱断裂早期愈合的影 响，为临床应用提供实验依据。 方法 1、PRP及PPP的制备 取10只大鼠行戊巴比妥腹腔麻醉后，用预先肝素化的10mL注射器行心脏穿 刺采血。采用Landesberg低密度两次离心法制备PRP。用移液器抽取离心管顶端 2、动物分组 取36只大鼠采用随机数字表法随机分为3组，分别为空白对照组、PPP组及 PRP组，每组12只。 3、动物模型制作及处理 将3组大鼠行巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉，无菌条件下于双侧跟腱跟骨止点 以近7mlTl处作横向切口，显露并切断跟腱，制备长2I姗的缺损。造模完成后， PRP组和PPP组大鼠双侧跟腱断端周围分别注射PRP及PPP，至跟腱局部形成肿 胀，每侧跟腱注射量约为100此，空白对照组不作处理。伤口直接缝合。之后每 周PPP组和PRP组跟腱周围局部注射1次，每次100ul，至处死取材。术后大鼠不 行外固定，笼中饲养，任其自由活动，术后3d每天肌肉注射40万U青霉素预防感 染。 4、标本观察 术后观察大鼠存活、活动及伤口感染等一般情况，以及大鼠跟腱愈合及跟腱 粘连情况，并对4周时跟腱进行粘连度分级。获取标本切片行HE染色，并在显微 镜下观察跟腱组织新生血管、成纤维细胞和炎性细胞形成情况。 5、指标测量 采用图像分析软件计算I型胶原纤维阳性密度值，并在术后4周时对大鼠跟 腱行生物力学测试，包括跟腱最大滑动距离、跟腱弹性模量及跟腱最大抗拉力。 6、统计学处理 Ⅱ 硕士学位论文 采用SPSSl3．0统计软件包进行分析。计量资料以均数士标准差表示，组间比较采 用单因素方差分析，满足方差齐性，组间分析差异显著时采用LSD法进行多重比 较，方差分析不齐，组间分析差异显著时采用DunneU法进行多重比较；等级资 料采用KruskM．WMlis检验；检验水准a--0．05。 结果 1、大鼠均存活至实验完成。 随着时间的延长，各组大鼠跟腱水肿逐渐减 退，滑动性逐渐改善；术后3周内各组跟腱粘连逐渐加重， 4周时减轻，各组跟 腱粘连程度分级差异均无统计学意义(矿=1．432，P=0．489)。 2、术后1周PRP组炎症细胞浸润、毛细血管及胶原纤维增殖较空白对照组、 PPP组明显，之后炎症反应及毛细血管生成逐渐减少；各时间点各组均可见I型 胶原纤维阳性表达染色，其中1、2、3周时PRP组阳性染色纤维多于空白对照组 4周时3组差异无统计学意义(F=2．714，P=0．107)。 3、生物力学测试：术