第八章-生物工程育种.ppt

一、意义： 自80年代Palmiter等将外源生长激素（GH）基因导入小鼠获得快速生长的超级小鼠以来，应用转基因技术获得具有速生、抗病、优质等性状的优良品种引起了人们的极大兴趣，相继开展了兔、鱼、鸡、猪、羊等动物的基因转移。 转基因动物研究已成为一个极具潜在价值的生物医学研究新领域。外源基因的导入已成为研究基因调控、发育分化、组织特异表达、培育生物新品种的一个有力手段，其发展潜力和应用前景受到广泛的重视。 2. 动物生物反应器 3. 异种器官移植 二、基因工程的概念genetic engineering 定义： 又称为重组DNA技术，指将某些特定的基因或DNA片断，通过载体或其它手段送入受体细胞，使它们在受体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。 目的: 是生产出符合人类需要的产品或创造出生物的新性状，并能稳定遗传。 三、基因工程技术路线 1、DNA片段的取得（目的基因的分离和制备） 2、DNA片段和载体的连接——重组体DNA 3、外源DNA片段引入受体细胞——基因克隆和基因文库 4、选择基因（目的基因） 5、目的基因表达 1、从简单的显微注射法向高效率的转基因体细胞核移植方向发展 从转基因的技术手段来看，除DNA显微注射法外，人们先后试过反转录病毒载体介导法、精子介导法、胚胎干细胞介导法和核移植法等多种转基因方法。 转基因细胞的核移植技术已经成为转基因动物生产的主流方法。 2、从外源基因随机插入（或整合）到定点整合的转变 转基因在基因组中的存在方式有两种，即随机整合和定点整合。 为了达到外源基因的高效表达，在转基因结构上增加了含有位点控制区（LCR）、核基质附着区(MAR)等调控元件，可以实现插入位点非依赖性、拷贝数相关的表达模式。LCR和MAR的功能不受种属差异的限制，无论外源基因插入什么位点，都能够维持一个开放的染色体结构，有利于基因的表达。 　　　基因打靶技术的出现与发展，实现了对目的基因的定位操作。 ３、从传统转基因到条件控制的转变 从转基因的策略来看，动物转基因技术的发展经历了两个阶段：第一阶段为传统转基因动物阶段，第二阶段为条件性转基因动物阶段。 　　　借助转基因技术可将单一的功能基因和基因簇引入高等动物的基因组，或将目的基因从动物基因组中敲除，实现了种系内和种系间基因转移或修饰，产生新的基因型和表型。 　　 目前转基因动物主要应用在生物学基础研究、医学疾病模型、动物生物反应器、异种器官移植、动物遗传改良等５个方面。 五、水生动物的转基因研究 水生动物方面的转基因研究，目前主要集中在转基因鱼的研究上。从1985年朱作言等报道了转基因鱼的工作以来，已将多种外源基因导入鲑鱼、鳟鱼、斑马鱼等。 研究的目的主要有两方面： 一是进行诸如生长激素（GH）基因 、抗冻蛋白（AFP）基因、病毒外壳蛋白基因等外源基因转基因动物研究，旨在通过外源基因的转移，使养殖动物获得抗冻、抗病、生长快速等新的生产性状，改良养殖品种的品质。 另一方面的研究目的是利用转基因手段解决发育生物学和分子生物学问题。 如Du等采用美洲大绵尉抗冻蛋白启动子－鲑鱼生长激素cDNA，将其转移进鲑鱼，成功地获得了比对照生长速率快4－6倍的转基因鱼，最大为对照的13倍（Du,et al.,1992）。如Ozato等研究了鸡?－晶状体蛋白基因在青胚胎中的表达，以及表达与发育过程的相关性（Ozato,et al.,1986）。还有研究不同启动子基因重组体在转基因鱼中的表达特性，以及一些在发育和生理上重要的基因（如生长激素基因）在发育中的调控作用（Stuart,et al.,1988; McEvoyg,et al.,1988）。 基因工程技术路线 （一）DNA片段的获得 1、从基因所在的生物体直接取得 限制性内切酶（restriction enzymes） 2、人工合成DNA片段（DNA合成仪） 3、PCR反应合成DNA 4、 mRNA反转录成cDNA，RACE技术 5、基因组文库和cDNA文库 （二）动物基因工程载体 质粒型表达载体 病毒载体 定向打靶载体 1 .质粒型表达载体 表达载体的共同特点是都带有原核复制区和选择性标记基因，保证重组DNA分子能够在大肠杆菌中扩增，同时也必须包括能在真核细胞表达的相关组件。一般包括转录外源DNA序列的启动元件、转录产物有效地加上poly（A）尾巴所必需的信号序列、真核细胞中的选择性标记，另外还增加了一些附加元件，如增强子、内含子、剪接供体与受点，以保证外源基因的高效表达。 2. 病毒载体 作为基因转移的病毒载体须具备以下基本条件：