AMPPRS1PRS3磷酸核糖焦磷酸氨基转移酶催化反应P-Ribose.PPT

改造酵母cAMP代谢途径增加其产量 王凯 2012207001 体内嘌呤核苷酸的合成 ①利用磷酸核糖、氨基酸、一碳单位及CO2等简单物质为原料合成嘌呤核苷酸的过程,称为从头合成途径(denovo synthesis)，是体内的主要合成途径。 ②利用体内游离嘌呤或嘌呤核苷，经简单反应过程生成嘌呤核苷酸的过程，称重新利用(或补救合成)途径(saluage pathway)。在部分组织如脑、骨髓中只能通过此途径合成核苷酸。 酿酒酵母的嘌呤代谢途径 cAMP ATP XMP AMP IMP GMP GTP AC ADP Adenosine Adenine inosine HX Guanine Xanthine dADP dATP dAMP PDE ① ② ③ ④ ⑤ PS：①腺苷酸脱氨酶(AMD1) ②腺嘌呤脱氨酶（AAH1） ③ 次黄嘌呤磷酸化酶 ④腺苷激酶(ADO1) ⑤AMP焦磷酸化酶(APT1/2) ⑥次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPT1） ⑦PNP1 ⑧ADE12 ⑨ADE13 ⑩IMD2 IMD3 IMD4 TAD1 TAD2 TAD3 RNR1 RNR2 RNR3 RNR4 Admylosuccinate ⑥ cGMP PDE ⑦ ⑧ ⑨ ⑩ 11 11 12 12 ⑥ ADK1 The function of genes FCY2编码嘌呤嘧啶通透酶，是一种质子转运体，从胞外吸收腺嘌呤，鸟嘌呤，次黄嘌呤和胞嘧啶 PGK是磷酸甘油酸激酶，是糖酵解途径中第一个产生ATP反应的酶，它催化1,3-二磷酸甘油酸+ADP PGK ?3-磷酸甘油酸 如何设计改造代谢途径？？ ADK1：腺苷酸激酶 催化反应：2ADP(GDP) ATP(GTP)+AMP PRS1,PRS3：磷酸核糖焦磷酸氨基转移酶 催化反应：5-P-Ribose PRPP ADE4:磷酸核糖焦磷酸氨基转移酶 催化嘌呤核酸从头合成的第一步反应 ADK1，ADE4，PRS3，PRS1的过表达 5-磷酸核糖 Prs1/Prs3 IMD2、IMD3、IMD4的敲除 IMP是合成AMP、XMP的前体，以阻断IMP合成XMP的途径，使IMP只合成AMP The strategy of design YPRCτ3-HF PGK1 ADK1 Repeat Ter HR URA3 YORWΔ17-HF PGK1 ADE4 Repeat Ter HR URA3 YPRCΔ15-HF PGK1 PRS3 Repeat Ter HR URA3 YORWΔ22-HF PGK1 PRS1 Repeat Ter HR URA3 实际工作 片段的整合，利用融合PCR技术到处目的片段 片段的验证 导入酿酒酵母发酵验证 工业应用 Thank you !