实验一-培养基的配制与灭菌.ppt

实验一植物培养基的制备与灭菌一、实验目的1、学习和了解培养基母液的配制方法。2、掌握培养基的配制方法。3、学习和了解培养基、器皿和相关设备的灭菌方法。二、主要实验用具和仪器设备烧杯（1000ml、500ml、100ml、50ml）、量筒（2000ml、1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、25ml、10ml）、容量瓶（1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、25ml）、试剂瓶（1000ml、500ml、200ml、100ml、50ml）、玻璃棒、油性标记笔、移液枪（5ml、1ml、200μl、100μl）、对应的枪头、培养基瓶（1000ml、500ml、200ml）等。电子天平（感量为0.1mg、10mg）、pH计、灭菌锅、微波炉、磁力搅拌器、电磁炉、超净工作台等。三、实验药品按培养基配方准备。1NNaOH、1NHCl。四、实验内容（一）MS培养基母液的配制1、大量元素母液的配制（配1L）无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，分别用50ml烧杯称量，用蒸馏水溶解，必要时加热。溶解后，倒入1000ml容量瓶中，最后用蒸馏水定容。在混合定容时，必须最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾能形成难溶于水的沉淀。将配好的混合液倒入细口试剂瓶中，贴好标签。配制培养基时，每配1000ml培养基，取大量元素母液100ml。化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大10倍称量（g/L）备注NH4NO3165016.5每升培养基取母液100mlKNO3190019.0KH2PO41701.7MgSO4●7H2O3703.7CaCl2●2H2O4404.42、微量元素母液的配制（配0.5L）无机盐中微量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大100倍，分别用50ml烧杯称量，用蒸馏水溶解，必要时加热。溶解后，倒入500ml容量瓶中，最后用蒸馏水定容。化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大100倍称量（mg/0.5L）备注MnSO4●4H2O22.31115每升培养基取母液10mlZnSO4●7H2O8.6430H3BO36.2310KI0.8341.5Na2MoO4●2H2O0.2512.5CuSO4●5H2O0.0251.25CoCl2●6H2O0.0251.253、铁盐母液的配制（配0.5L）目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。常常配成200倍母液，溶解时可加热。化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大200倍称量（g/0.5L）备注Na2EDTA37.253.725每升培养基取母液5mlFeSO4●7H2O27.852.7854、有机物母液的配制（配0.5L）MS培养基中，有机物为甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫氨素（V-B1）、盐酸吡哆素（V-B6），常常配成1000倍或100倍母液。本实验将有机物配成100倍母液。化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大100倍称量（mg/0.5L）备注Glycine（甘氨酸）2.0100每升培养基取母液10mlThiamine-HCl（VB1）0.420Pyridoxine-HCl(VB6)0.525Nicotinicacid(烟酸)0.525Inositol（肌醇）10050005、植物生长调节剂（激素）母液的配制配制生长素类，如2,4-D、萘乙酸、吲哚乙酸等，应先用少量（1-2ml）的乙醇溶解，然后用蒸馏水定容；配制细胞分裂素时，先用少量的1NHCl或1NNaOH溶解，然后用蒸馏水定容。最终各种激素母液浓度应均为1mg/ml。以上各种母液必须用蒸馏水配制，然后保存在冰箱（4℃）中，一般可保存几个月，当发现沉淀或霉团时，则不能继续使用。（二）MS培养基的配制1、培养基配方MS1：MS基本培养基+2,4-D1.0mg/L+KT0.1mg/L+琼脂8g/L（烟草愈伤组织诱导和培养）MS2：MS基本培养基+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L+琼脂8g/L（烟草苗的微繁殖）MS3：MS基本培养基+2,4-D1.0mg/L（烟草细胞悬浮培养）注：MS基本培养基包括大量元素、微量元素、铁盐、有