高中生物微生物的培养.ppt

第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择________稀释度的菌液，分别取0.1mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培养并计算出__________。第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在________的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。③计算公式：每克样品中的菌株数＝C/V×M，其中C代表_______，V代表___________________(mL)，M代表____________。(2)显微镜直接计数法①原理：此法利用特定的____________或______________，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1mm2和高0.1mm的计数室，在1mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，计数室由_____个小格组成。三个菌落平均数30～300某一稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平板时所用的稀释液的体积稀释倍数细菌计数板血细胞计数板400第32页,共52页，2024年2月25日，星期天②操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。③计数公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。(3)设置重复和对照①设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布________个平板，才能增强实验的说服力与准确性。②设置对照：实验中应设置对照，主要目的是________________________对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。如__________对照组，观察培养物中是否有杂菌污染；设置________培养基，观察选择培养基是否具有________作用。二、实验设计实验步骤1．土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土3cm左右，迅速取土壤并装入____________密封或事先准备好的________中。至少3排除实验组中非测试因素空白完全筛选无菌信封烧杯第33页,共52页，2024年2月25日，星期天2．制备培养基：①制备________________培养基作为对照组，尿素为唯一氮源的培养基作为________，用来判断选择培养基是否具有____________。②放宽稀释范围，如稀释倍数为103～107范围内的要分别涂布，而每个稀释度下需要______个选择培养基、________个牛肉膏蛋白胨培养基，因此需要15个选择培养基和5个牛肉膏蛋白胨培养基。③两种培养基应各有一个作为________对照，此外还需准备8个灭菌的试管和1个灭菌的移液管。3．样品的稀释与涂布平板：参考下面的实验流程示意图，将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中(锥形瓶体积为250mL)，充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有________mL生理盐水的无菌大试管依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取______mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。牛肉膏蛋白胨实验组选择作用31空白90.1第34页,共52页，2024年2月25日，星期天说明：图中的1、2、3平板是____________，4为____________________作对照，判断选择培养基是否具筛选作用，还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，验证培养基中是否____________。4．将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。5．挑选选择培养基上不同形态的菌落接入含____________培养基的斜面中，观察能否产生颜色反应。选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基含有杂菌酚红指示剂第35页,共52页，2024年2月25日，星期天6．细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在________的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出____________，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。同时仔细观察所分离到的菌落，并记录菌落特征。