DB22T-实验用斑马鱼质量控制第4部分：组织形态学评价方法.doc

DB/***—20**

PAGE4

实验用斑马鱼质量控制第4部分：

组织形态学评价

Qualitycontroloflaboratoryzebrafish

Part4:Evaluationmethodofhistomorphology

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT吉林省市场监督管理厅???发布

XXXX-FORMTEXTXX-XX发布

ICS?FORMTEXT?????

FORMTEXT?????

FORMTEXT?????

DBFORMTEXT22

FORMTEXT吉林省地方标准

DBFORMTEXT22FORMTEXT?????—FORMTEXT????

FORMTEXT?????

DB22/***—20**

PAGE3

前??言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本标准由吉林省科技厅提出并归口。

本标准起草单位：吉林大学。

本标准主要起草人：孙巍、杨光、张大维、于慧美、徐彩云、崔佳润、刘亚男、郭莹。

组织形态学评价

范围

本标准确立了实验用斑马鱼组织形态学评价的规范流程，包括标本采样、检测频率、检测程序、检测内容及技术方法、结果判定等要求。

规范性引用文件

下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T39649-2020实验动物实验鱼的质量控制

术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

实验用斑马鱼（laboratoryzebrafish）：经人工饲养、繁育、不携带所规定的鱼的烈性传染病病原和与人共患病的病原，遗传背景明确或者来源清楚的用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的斑马鱼。

检查程序

检查程序见图1。

图1

5检查内容及技术方法

5.1检查内容

5.1.1活体检查

观察样本鱼体表、色泽、营养、发育和活动情况。

5.1.2形态检查

肉眼观察样本鱼形态，检查鳞片、皮肤、皮下、侧线，机体外观形态及功能状况。检查鳃外侧、内侧和鳃片，检查鳃弓、鳃丝。检查口腔，有无寄生虫或其包囊。

5.1.3组织学检查

样本鱼麻醉处死后进行解剖，对胸体腔及腔内组织器官利用解剖镜进行形态学检查。利用光学显微镜，对组织器官进行组织形态学分析。

5.2检查方法

5.2.1取材

5.2.1.1胸腹腔内器官

将标本鱼进行麻醉后捞出，用纸吸干鱼表面水渍，将斑马鱼置于培养皿中，腹部朝上，用解剖剪在泄殖孔与体轴垂直方向剪一小口，再将鱼侧卧，自泄殖孔向背方剪到脊柱，沿测线下方剪至鳃盖后源，再至鳃盖后缘剪至下颚。分别取胸腹腔内组织器官，包括心脏、肝、脾、肾脏、胃肠、精巢或卵巢、鳔、胆囊、膀胱。

5.2.1.2脑

利用解剖镜，使用镊子挑去脑骨肌肉，在PBS中剥离脑组织。

5.2.1.3眼球

解剖剪剪开鳃盖，取出眼球。

5.2.1.4脊髓

分别从头部和尾部与躯干交接处的脊柱剪断，用镊子从前端端口夹出脊髓，涂片。

5.2.1.5肌肉

用镊子剥离皮肤与肌肉组织，取出肌肉组织。

5.2.2制作石蜡切片

组织固定后，石蜡包埋，并进行常规石蜡制片。

5.2.3HE染色

HE染色，光镜观察组织形态情况。

6检查结果及结论

合格判定：所有被检样本鱼的活体检查、形态检查和组织学检查均未检出明显的病理变化，或活体检测或形态检查出现轻度异常，组织学检查未检出明显的病理变化，该实验用斑马鱼群判为合格。

不合格判定：当被检样本鱼的活体检查、形态检查和组织学检查均出现一尾及一尾以上明显的感染性病变，或出现两尾及两尾以上明显的病变时，则判定该实验用斑马鱼群为不合格，并注明病变的比率。