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第6章 植物的胚胎培养和离体授粉

第1节 胚胎培养

对无菌分离出的成熟胚或未成熟胚进行体外培养,以获得发育正常的植株的技术.双子叶合子胚的发育过程：原球胚、心形胚、鱼雷胚、子叶形胚和成熟胚等阶

段.

成熟胚:具有完整的胚芽、胚根、胚轴和子叶等.未成熟胚:子叶形胚前各发育期的胚.

广义胚培养还可包括胚珠和子房培养以及胚乳培养等

成熟胚培养

培养基 成熟胚在简单的培养基上就可培养，一般由大量元素的无机盐和蔗糖组成。

培养方法：

成熟种子

?

表面消毒

?

在超净台中解剖种子

?

取出胚种植在培养基上

?

在常规条件下培养

幼胚培养 幼胚在胚珠中是异养的，因此需要通过培养基提供各类营养和生物活性物质。

影响幼胚培养的因素

1)胚胎的发育时期

(1）双子叶植物一般心形期以后的双子叶胚较易培养;胚龄越小越难培养成功。(2）单子叶胚 一般受精后8d左右，长度在0.5mm以上的禾谷类胚在离体培养时较易成活;越小越难。

培养基

比成熟胚要求高.常用Nitsch、MS、1/2MS等，禾谷类还常用N6、B5等.

无机盐:成分较复杂，含多种微量元素。

碳水化合物:蔗糖是多数植物最好的碳源,也有渗透调节作用.蔗糖浓度一般高于成熟胚.

维生素: 发育初期的幼胚必需加入某些维生素 .常用:硫胺素、生物素等 .

（YE）

氨基酸：对不同植物和不同发育时期的幼胚,各种氨基酸的效果不同. （CH）

植物生长物质:低浓度的生长素、赤霉素或激动素对某些植物幼胚生长有益处.不同植物和不同发育阶段的幼胚要求不同。

天然附加物：幼胚培养基中常添加一些植物的胚乳.

采用Monnier(1976,1978)建立的双培养基培养方法可培养50~60微米长的早期球形胚.

培养条件

温度：大多数植物胚胎培养的温度为25~30oC,但不同植物要求不同。光照：幼胚培养初期一般在弱光或黑暗条件下培养。也因植物而异.pH：不同植物和不同时期的幼胚对pH的要求不同.

气体成分: 二氧化碳;氧气等的不同浓度对幼胚培养也有影响。

培养方法

取材→幼胚剥离→接种培养

例：双子叶植物（球形胚晚期以及更大的荠菜胚）的培养：消过毒的荠菜蒴果放在几滴无菌培养基中

?用镊子将蒴果外壁的两半撑开，露出胚珠

?解剖镜下可见胚珠中绿色的鱼雷形或更幼龄胚

?由胎座上取下一个胚珠，放在凹玻片中（内有一滴培养基）

?用锋利的有柄刀片将胚珠纵切成两半

?留下有胚的一半，仔细剔除胚珠组织

?取出联着胚柄的完整胚

(较老胚在胚珠上无胚的一侧切一小口，用钝头解剖针轻压珠被?把完整的胚挤出到周围的液体中)

?接种到Monnier(1976)培养基上

?幼胚发育到鱼雷形阶段

?转移到降低了蔗糖浓度（2~3%）的同样培养基上

?发育成熟

?植株

植物胚胎培养的应用

远源杂交中克服杂种不育（胚胎拯救）

挽救杂种胚以产生稀有杂种.如：普通大麦和球茎大麦；柑橘类合子胚培养等。

促进无生活力或生活力低下的种子萌发

如:野生食用芭蕉（M.balbisian）a;早熟桃和樱桃;椰子(Makapuno)等.

缩短育种周期

克服种子休眠；生活力快速鉴定；GA

单倍体的产生

如大麦?球茎大麦；小麦?玉米：胚胎发育早期父本染色体被排除，形成单倍体

胚，生长相当缓慢。

必须把胚剥离出来进行培养，才能得到单倍体植株。

植物种质保存

幼胚具备超低温保存要求细胞原生质浓、无液泡化、细胞壁较薄等有利条件,

因此用幼胚进行超低温种质保存效果较好.

理论研究

第2节胚珠和子房培养

胚珠培养(ovuleculture)

包括授粉和未授粉胚珠的培养

授粉胚珠培养方法:

授粉时间合适的子房?表面消毒

?无菌剥出胚珠（一般带胎座）?培养

培养基

应用较多的有MS、White,NitschN6等.

根据胚珠发育时期的不同、是否带胎座及不同植物种类,需要加不同的植物生长物质。

有的还要再加一些天然提取物.蔗糖浓度5%左右。

影响胚珠培养的因素

发育时期 球形胚或更后期的胚珠,较易培养；培养基较简单.

有机成分 培养基中添加胚乳往往有利不同植物对不同种类的激素反应不同.

胎座组织

胎座组织的存在一般对胚珠中胚的生长发育有重要作用.

子房培养

包括授粉或未授粉子房的离体培养.

培养基

MS、Nitsch、White等培养基的无机盐,加入适当的有机成分和植物生长物质.有时也可加一些复杂的天然提取物.

外植体

受精子房：授粉后一定时间摘取花蕾,除去花萼、花冠和雄蕊,进行表面消毒，接种。未受精子房：在开花前1~5d摘取花蕾,其它同上。

子房培养物的细胞倍性 n，2n，3n

未传粉子房和胚珠培养产生单倍体

影响离体子房和胚珠产生单倍体的主要因素:

供体植物的基因型和子房的发育阶段

不同植物及不同品系诱导产生单倍体植株的频率有明显