超临界流体色谱在生物工程中应用的新进展.PDFVIP

维普资讯 第 2l卷 第 4期 分 析 科 学 学 报 2005年 8月 Vo1．2l NO．4 JOURNAL ()F ANALYTICAL SCIENCE Aug． 2005 文章编号 ：1006—6144(2005)04—0444—05 超 临界流体色谱在生物工程 中应用的新进展 杨长龙 。，胡浩权 ，张维冰 ，张玉奎 (1．大连理工大学化工学院，辽宁大连 116024；2．大连化学物理研究所 ，辽宁大连 116011； 3．齐齐哈尔大学化工学 院；黑龙江齐齐哈尔 161006) 摘 要 ：超 临界流体 色谱 (SFC)是高效液相 色谱 (HPLC)和气相 色谱 (GC)的重要补充 技 术。用 SFC可 以分离多数不能用GC分 离的低挥发性物质。与传统的 HPLC相 比， SFC的分 离速度更快、效率更高。本文综述 了SFC在生物分子分 离分析方面应用的新 进展 。引用文献 74篇 。 关键词 ：超临界 色谱 ；生物分子 ；分离；综述 中图分类号 ：O657．7 文献标识码 ：A l 引言 超临界流体色谱 (SFC)是以超临界流体 (sF)为流动相的色谱过程。超临界流体的密度接近于液体， 粘度接近于气体，扩散系数介于两者之间，因而具有 良好的溶解能力和传质特性。 自Lovelock首先提 出 用 SF作为色谱流动相的设想 和 Klesper等发表了第一篇超临界流体色谱方面的论文后 ，该技术得 到了 快速的发展 。进入 20世纪 80年代 ，随着毛细管 SFC技术 的出现 ]，超临界色谱技术 日趋完善 。SFC作 为气相色谱 (GC)和高效液相色谱 (HPLC)的补充 ，具有以下优点 ：(1)SFC的分离温度比GC低 ，分离 ／分 析热敏性 、非挥发性样品明显优于 GC；(2)与 HPLC相比，SFC的分离速度更快、样品处理方便 ，并常表现 出较高的选择性 ；(3)SFC可以兼容多种检测器 ，实现联机在线色谱联用技术，如 SFC—MS[3 ]、SFC—FT— IR[引、SFC—NMR【等 。 CO。是最常用 的SFC流动相 ，它具有无毒、临界条件适 中(Tc=31．2℃，Pc一7．3MPa)、环境友好等 特点，非常适合于分离分析生物样品。虽然其极性较低 ，但通过添加适 当的改性剂，几乎可以对所有 的极 性化合物进行有效的洗脱 -1 。SFC的应用领域非常广泛 ，可用于分离分析热敏性物质、非挥发性高分 子、生物大分子和手性对 映体n卜¨]等。本文对 SFC在生物工程领域 中应用 的新近进展加以系统综述 。 2 超 临界流体色谱用于分离生物样 品 2．1 糖类 很多种色谱方法可用于糖类的分析 (如 LC、CE等)，但都存在一定的局限性 ，最简单 的方法是无需对 样品进行衍生化处理 。CE的分离效率高且需要的样 品量小 ，但一般要对样品衍生化 ，未衍生化分离样品 的报道较少。由于该类化合物中多数含有低 聚或多聚体 ，用 LC分离时需要梯度洗脱 ，比较麻烦 。用 SFC 分离分析糖类相对要容易得多，一般无需进行衍生化处理 ，并有较高的分离选择性[1 。 ChesterE¨最早用纯 CO。作为SFC的流动相，研 究了低聚糖、多聚糖及聚甘油酯 的保 留性质 ，研究结 果表明，对于含一到四个 自由羟基 的聚甘油酯类 ，用纯 CO。可以分离，但峰形较宽且有拖尾 ，尤其是含有 四 个 自由羟基的聚甘油酯 ，峰形更差。若将样品衍生化可使保 留值下 降且峰形变窄。聚糖在纯 CO。中的溶 解度太低，不易分离 ，而用硅烷衍生化后 ，可以分离洗脱且峰型 良好 。Garrand0]采用蒸发光散射检测技 术(ELSD)，对两种单糖进行 了简单的分离 。 由于糖类是极性较强的化合物 ，目前用 SFC分离时通常需在主流动相 CO。中加入第二组分 ，作为流 收稿 日期 ：2003—05—18 通讯联系人：杨长龙 444 维普资讯 第 4期